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ELISA的五種實(shí)驗(yàn)原理及常見(jiàn)問(wèn)題

  ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。
  
  ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)常用的非離子型去污劑。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,在去除洗滌過(guò)程中的一些非異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用,ELISA試 劑盒因?yàn)楹苋菀妆幌吹?。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請(qǐng)勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會(huì)降低異結(jié)合,產(chǎn)生假陰性。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可協(xié)助洗滌過(guò)程中的封閉。
  
  1.雙抗夾心法:適用于大分子物質(zhì)的檢測(cè)。將已知的可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體表面,利用抗原抗體異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法,具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便等。
  
  2.競(jìng)爭(zhēng)法:競(jìng)爭(zhēng)法適用于較少表位的小分子物質(zhì)。將抗體包被于微孔板中,加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn),加入標(biāo)準(zhǔn)品和生物素標(biāo)記的抗原物質(zhì)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。
  
  3.直接法:主要用于抗原的檢測(cè),將抗原直接固定在固相載體上,洗滌后加入酶標(biāo)異性抗體,洗滌后加入底物顯色,該方法對(duì)抗體的異性要求較高。
  
  4.間接法:主要用于抗體的檢測(cè)。將異性抗原包被在固相載體表面,與標(biāo)本中相應(yīng)異性抗體結(jié)合,洗滌后加入酶標(biāo)的抗體,洗滌后加入底物顯色。該方法對(duì)抗原的異性要求較高。
  
  5.捕獲法:捕獲法主要用于血清中某種抗體亞型的檢測(cè)。先將針對(duì) IgM的第二抗體連接與固相載體,用以結(jié)合樣品中的所有 IgM,洗滌除去 IgG等無(wú)關(guān)的物質(zhì),然后加入異性抗原與待檢 IgM結(jié)合,再加入抗原異的酶標(biāo)抗體,后形成固相二抗-IgM-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,加酶底物顯色即可對(duì)樣品中待檢 IgM是否存在及其含量進(jìn)行測(cè)定。
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