細(xì)胞傳代培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)的常規(guī)方法之一，當(dāng)細(xì)胞隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)和細(xì)胞分裂時(shí)，細(xì)胞之間會(huì)發(fā)生接觸和接觸，生長(zhǎng)速度減慢甚至停止，并且也會(huì)因營(yíng)養(yǎng)不足和代謝產(chǎn)物的積累而不利于細(xì)胞生長(zhǎng)或中毒。因此，一旦細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長(zhǎng)滿，就需要稀釋并接種到多個(gè)培養(yǎng)瓶中，細(xì)胞才能繼續(xù)生長(zhǎng)。

　　細(xì)胞傳代目的 不僅可以擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)量，還可以避免細(xì)胞因生長(zhǎng)停滯甚至衰減而大量死亡的困境，因此，為了使細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，維持細(xì)胞旺盛的分裂能力，此時(shí)需要進(jìn)行細(xì)胞傳代。

　　為什么要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分裂

　　一旦開始細(xì)胞培養(yǎng)，就無(wú)法無(wú)限期地生長(zhǎng)，因?yàn)橛邢蘅臻g內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量不斷增加，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗，以及毒性代謝物的增加最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。傳代培養(yǎng)或分裂細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生比原始培養(yǎng)物細(xì)胞密度更低的新培養(yǎng)物。通過去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基和基質(zhì)中，細(xì)胞可以獲得新鮮的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并去除有毒代謝物，從而可以長(zhǎng)期維持培養(yǎng)。最初接種細(xì)胞后，生長(zhǎng)從滯后期開始，然后進(jìn)入對(duì)數(shù)期，細(xì)胞呈指數(shù)增殖，然后進(jìn)入生長(zhǎng)率和死亡率相等的穩(wěn)定期。（圖1）。在死亡階段，細(xì)胞因缺乏營(yíng)養(yǎng)或培養(yǎng)條件不充分而死亡，例如當(dāng)細(xì)胞因高或過度匯合而開始爭(zhēng)奪空間時(shí)。

　　圖1：細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線：培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線由四個(gè)階段組成：生長(zhǎng)開始前的潛伏期（滯后期）、指數(shù)生長(zhǎng)期（對(duì)數(shù)期）、細(xì)胞數(shù)量快速增長(zhǎng)逐漸減緩的穩(wěn)定期和細(xì)胞因缺乏營(yíng)養(yǎng)和生活條件不當(dāng)而死亡的死亡期。對(duì)數(shù)期應(yīng)更換培養(yǎng)基，細(xì)胞應(yīng)在達(dá)到穩(wěn)定期之前進(jìn)行傳代。

　　為了使細(xì)胞保持最佳培養(yǎng)條件并積極生長(zhǎng)，必須定期更新生長(zhǎng)培養(yǎng)基并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞類型，對(duì)數(shù)期可以多次更換培養(yǎng)基。傳代培養(yǎng)細(xì)胞的最佳時(shí)間是在對(duì)數(shù)期和穩(wěn)定期之間，即細(xì)胞匯合之前。

　　為什么要檢查細(xì)胞？

　　每天檢查細(xì)胞培養(yǎng)物（包括在傳代培養(yǎng)前檢查）非常重要，這是監(jiān)測(cè)細(xì)胞健康狀況、檢查污染和確定何時(shí)分裂細(xì)胞的一種手段。首先可以用肉眼在宏觀層面檢查培養(yǎng)物是否有真菌污染、渾濁度和培養(yǎng)基中的顆粒以及培養(yǎng)基顏色變化指示的意外pH值變化。但應(yīng)在高放大倍數(shù)下確認(rèn)沒有細(xì)菌污染。此后，應(yīng)使用倒置顯微鏡仔細(xì)檢查細(xì)胞的一般形態(tài)和生長(zhǎng)模式。倒置顯微鏡的光學(xué)元件位于標(biāo)本下方。因?yàn)榧?xì)胞附著在培養(yǎng)皿底部，所以從這個(gè)角度可以輕松觀察到它們。觀察時(shí)應(yīng)使用總放大倍數(shù)100–200倍和相差，因?yàn)榇蠖鄶?shù)細(xì)胞在正常明場(chǎng)照明下難以觀察到。

　　如何對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行傳代？

　　準(zhǔn)備細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)的最常用方法是使用胰蛋白酶等蛋白水解酶破壞細(xì)胞間和細(xì)胞與底物之間的鍵。胰蛋白酶與乙二胺四乙酸(EDTA)結(jié)合可使細(xì)胞脫離生長(zhǎng)表面。胰蛋白酶切斷將細(xì)胞固定在培養(yǎng)皿上的粘著斑，EDTA充當(dāng)鈣螯合劑。

　　根據(jù)細(xì)胞類型或下游實(shí)驗(yàn)，可以使用其他蛋白酶替代胰蛋白酶，例如天然膠原酶或合成解離混合溶液。

　　通過去除鈣，參與細(xì)胞間相互作用的鈣粘蛋白被破壞，細(xì)胞彼此分離。一旦它們不再與生長(zhǎng)表面和周圍細(xì)胞結(jié)合，就可以輕松地將它們分離并在新的細(xì)胞培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)。每種細(xì)胞類型的細(xì)胞培養(yǎng)條件和傳代培養(yǎng)方法各不相同。在整個(gè)傳代培養(yǎng)過程中，在無(wú)污染的環(huán)境中工作非常重要。在開始時(shí)、胰蛋白酶消化過程中、細(xì)胞計(jì)數(shù)和分裂后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行檢查是必不可少的。為了獲得一致的結(jié)果和跟蹤實(shí)驗(yàn)，保存良好的記錄和文檔也很重要。

　　好了，今天紀(jì)寧生物為大家介紹細(xì)胞傳代，因篇幅有限，細(xì)胞傳代步驟單獨(dú)一篇文章為大家詳細(xì)介紹。細(xì)胞傳代對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)是非常關(guān)鍵的步驟，它決定了下游實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)的好壞。了解細(xì)胞傳代原理，為后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)步驟打下基礎(chǔ)。