7380-40-7 / 佛手柑素的主要應(yīng)用

背景及概述^[1]

佛手柑素(bergamottin)，別名佛手柑亭、香檸檬亭、香檸檬素，存在于佛手、柚類、葡萄柚等柑橘屬水果以及一些傳統(tǒng)中 藥材如羌活中，不溶于水，能溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑。佛手柑素是一種天然的呋喃香豆素類化合物，然而市面上高純度佛手柑素售價(jià)昂貴且稀少，因此絕大多數(shù)活性研究?jī)H限于體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步的體內(nèi)代謝研究卻相對(duì)較少。關(guān)于“從天然植物中快速有效地提取分離純化佛手柑素”的研究也少見報(bào)道。柚子是我國(guó)南方地區(qū)盛產(chǎn)的一種水果，然而占整果43％～48％的柚皮在鮮食或食品加工過程中卻通常被丟棄，這不僅造成嚴(yán)重的資源浪費(fèi)，還導(dǎo)致環(huán)境污染。研究從柚皮中提取高純度的佛手柑素，可進(jìn)一步加強(qiáng)柚皮資源的開發(fā)利用，降低生產(chǎn)成本，提高原料利用率，并為佛手柑素的藥學(xué)活性研究及其相關(guān)作用機(jī)理研究提供工作基礎(chǔ)和技術(shù)支持，最大程度地提高柚子的附加值。

應(yīng)用 ^[1-3]

藥學(xué)活性研究表明，佛手柑素能使細(xì)胞色素P450酶系中多種藥物代謝相關(guān)酶失活，從而影響胃腸道對(duì)藥物的吸收，增加口服藥物的生物利用度。此外，佛手柑素還能抑制癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，具有抗癌、抗菌、防誘變等多種生物學(xué)活性，受到廣泛關(guān)注。

此外，研究證實(shí)在人肝癌HepG2細(xì)胞(invitro）中佛手柑素表現(xiàn)出顯著的葡萄糖消耗活性，具良好的濃度依賴性，且其作用濃度遠(yuǎn)低于陽(yáng)性藥二甲雙胍，而藥效卻優(yōu)于二甲雙胍。在糖尿病KK-Ay小鼠體內(nèi)（invivo）佛手柑素可以顯著降低糖尿病KK-Ay小鼠的血糖，增加葡萄糖耐量和胰島素敏感性?？勺鳛橹委熕幬锘蚬δ苁称贰⒈＝∑酚糜谔谴x異常相關(guān)疾病的防治。

另外，體外試驗(yàn)研究了佛手柑素對(duì)辛伐他汀在大鼠和人肝微粒體中代謝的抑制作用。將大鼠或人肝微粒體與佛手柑素(25~100 μmol/L)+辛伐他汀( 10-250μmol/L )在有或無(wú)還原輔酶I 的情況下共同培養(yǎng)15min。結(jié)果顯示，在大鼠肝微粒體中，佛手柑素與辛伐他汀合用，影響后者的抑制功效，Ki值為174μmol/L，大于以佛手柑素預(yù)處理的Ki值( 有和無(wú)還原輔酶II時(shí)分別為45 和4μmol/L )。因此以佛手柑素與大鼠肝微粒體預(yù)培養(yǎng)(尤其存在還原輔酶II時(shí)) 可增強(qiáng)對(duì)辛伐他汀代謝的抑制。佛手柑素在大鼠肝微粒體中代謝的試驗(yàn)表明，有2 種依賴于CYP45 0 的代謝產(chǎn)物形成，即佛手柑素的脫烷基化產(chǎn)物和經(jīng)基化產(chǎn)物。對(duì)人肝微粒體的試驗(yàn)顯示，佛手柑素+ 辛伐他汀與人肝微粒體在還原輔酶II存在或不存在條件下共同培養(yǎng)，Ki分別為34 和22μmol/L，以佛手柑素預(yù)培養(yǎng)的Ki為27μmol/L，表明佛手柑素對(duì)辛伐他汀的抑制作用未受影響。在大鼠和人肝微粒體內(nèi)，佛手柑素對(duì)辛伐他汀的肝代謝是一種復(fù)合型抑制劑。佛手柑素這種物種間不同的抑制機(jī)理與不同肝臟中涉及辛伐他汀代謝的CYP 同工酶的不同，或者說(shuō)是佛手柑素與大鼠和與人同工酶有不同的親和力。

制備^[3]

一種從早香柚油胞層中分離純化佛手柑素的方法，有如下優(yōu)點(diǎn)：(1)工藝簡(jiǎn)單，不需要惰性氣體保護(hù)及高溫高壓；(2)生產(chǎn)流程較安全、易操作；(3)生產(chǎn)周期較短；(4)純化的產(chǎn)物純度高，回收率高；(5) 整個(gè)過程使用HPLC精確定量，保證準(zhǔn)確度；(6)提取和HSCCC所用溶劑可回收后重復(fù)使用，成本低。通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：

(1)制備硅膠粗提物粉末：一定質(zhì)量烘干的早香柚油胞層粉末用石油醚(60～90 ℃)按固液比1:20超聲提取兩次，過濾后合并兩次濾液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干得浸膏，與適量硅膠拌樣，揮干后制成上樣粉末，按上樣量與硅膠用量為1g:50g的比例裝柱，加入上樣粉末后的硅膠柱用石油醚-乙酸乙酯(13:1)溶液洗脫佛手柑素，合并含有佛手柑素的洗脫液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上40℃蒸干得硅膠粗提物粉末；

(2)分離純化佛手柑素：配制己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1:1:2:0.625)溶劑體系，充分搖勻靜置1h后，分別接出上、下相，超聲脫氣30min，上相為固定相，下相為流動(dòng)相。固定相先以30mL/min流速泵入高速逆流色譜(HSCCC)，穩(wěn)定后，將逆流色譜儀的轉(zhuǎn)速調(diào)至900rpm，同時(shí)流動(dòng)相以2mL/min速度通過HSCCC，待流出液分層(即流出的固定相體積恒定)后，將硅膠粗提物溶于適量固定相進(jìn)樣(進(jìn)樣濃度約為12mg/ml)，根據(jù)檢測(cè)圖譜分管收集各組分，用高效液相色譜(HPLC)測(cè)定各管純度，合并含有單一佛手柑素的各管，在旋轉(zhuǎn)蒸干儀上蒸干即得到高純度佛手柑素，回收率≥65％，產(chǎn)品純度均≥94％。

主要參考資料

[1] CN201410388027.2佛手柑素在制備防治糖尿病藥物中的應(yīng)用

[2] 葡萄柚汁中的香檸檬亭對(duì)辛伐他汀在大鼠肝微粒體中代謝的抑制作用

CN201710543355.9一種從早香柚油胞層中分離純化佛手柑素的方法