2292-16-2 / 甲基蓮心堿的藥理作用

背景及概述^[1][2]

甲基蓮心堿(neferine，Nef)是從睡蓮科植物蓮(Nelumbo nuci fera Gaertn)成熟種子的綠色胚芽中提取出的一種雙芐基異喹啉類生物堿(分子式C₃₈H₄₄N₂O₆)。研究表明它具有擴(kuò)血管、降壓，抗心律失常，抗血小板聚集，抗血栓形成，抗氧化，抗有機(jī)磷農(nóng)藥中毒，抗瘢痕形成以及化療增敏等藥理作用。

藥理作用^[1][2]

1.對(duì)腫瘤藥的增敏作用

腫瘤細(xì)胞對(duì)化療不敏感，影響了治療效果而且化療又有不同程度的不良反應(yīng)，即藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)某些正常組織有一定的損害，尋找化療增效藥物變得尤為重要。因而我們?cè)噲D尋找一種化療增敏劑用于骨肉瘤的治療以增強(qiáng)化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用并降低它對(duì)正常細(xì)胞的毒性。大量的研究表明，甲基蓮心堿具有廣泛的提高化療療效的作用，且毒副作用較小。

1）甲基蓮心堿對(duì)骨肉瘤的作用：骨肉瘤細(xì)胞對(duì)化療不敏感，影響了治療效果而且化療又有不同程度的不良反應(yīng)，即藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)某些正常組織有一定的損害，尋找化療增效藥物變得尤為重要。

研究顯示無(wú)明顯不良反應(yīng)的甲基蓮心堿(Nef)使阿霉素(ADM)，5-氟尿嘧啶(5-Vu)，順鉑(CDDP)，鬼臼乙叉苷(VP16)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞(Saos-2)細(xì)胞不良反應(yīng)增強(qiáng)，表明Nef 對(duì)骨肉瘤細(xì)胞(Saos-2)細(xì)胞有化療增效作用。誘導(dǎo)凋亡可能是不同作用機(jī)制的抗癌藥發(fā)揮作用的共同途徑。

他們通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)Nef 對(duì)ADM 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果表明Nef 不誘導(dǎo)Saos-2 細(xì)胞凋亡，但可顯著增強(qiáng)ADM 誘導(dǎo)Saos-2 細(xì)胞凋亡作用。提示增強(qiáng)抗癌藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡可能是Nef 增敏機(jī)制之一。

2）甲基蓮心堿對(duì)肺癌的影響：建立小鼠Lew is 肺癌皮下移植瘤模型以研究甲基蓮心堿與順氯氨鉑協(xié)同對(duì)肺癌的影響，結(jié)果表明，Nef 具有增強(qiáng)順氯氨鉑(CDDP)抑制小鼠Lewis 肺癌移植瘤生長(zhǎng)作用，Nef 合用CDDP 后不顯著增加藥物的肝、腎毒性。

以荷Lew is 肺癌小鼠為模型：?jiǎn)为?dú)使用Nef 對(duì)小鼠Lewis 肺癌移植瘤基本無(wú)效，但與環(huán)磷酰胺(CTX)合用后明顯提高了CTX 的抑瘤效應(yīng)，說(shuō)明兩者合用產(chǎn)生明顯的協(xié)同作用；單用Nef 時(shí)，瘤細(xì)胞凋亡率不高，但與CTX 合用后，明顯提高了CTX 誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡率，表明Nef 通過(guò)增強(qiáng)CTX 誘導(dǎo)Lewis 肺癌細(xì)胞的凋亡起作用，可能啟動(dòng)了凋亡程序促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。

3）甲基蓮心堿對(duì)乳腺癌的影響：應(yīng)用Tunel法和PI 染色流式細(xì)胞儀，間接免疫熒光流式細(xì)胞儀；高效液相色譜法(HPLC)研究了甲基蓮心堿對(duì)耐阿霉素人乳腺癌細(xì)胞凋亡抗性的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Nef 能顯著增強(qiáng)耐阿霉素人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7/ Adr)內(nèi)阿霉素(ADR)的積累而未見顯著增加敏感株內(nèi)ADR 的積累，提示Nef 也能通過(guò)抑制P-g p功能、減少藥物的外排而克服MDR 細(xì)胞的凋亡抗性。

采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法；PI 染色流式細(xì)胞計(jì)數(shù)；間接免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)；HPLC 研究甲基蓮心堿逆轉(zhuǎn)耐阿霉素人乳腺癌細(xì)胞多藥耐藥性(MDR)的作用及機(jī)制，同樣表明Nef 具有逆轉(zhuǎn)耐阿霉素人乳腺癌細(xì)胞MDR 的作用，其作用機(jī)

理與促進(jìn)MDR 細(xì)胞內(nèi)ADM 積累和下調(diào)MDR 細(xì)胞P-pg 表達(dá)有關(guān)。采用MTT 法，高效液相色譜法，RTPCR技術(shù)及蛋白質(zhì)印跡技術(shù)探討甲基蓮心堿(Nef)對(duì)耐藥人乳腺癌細(xì)胞增殖，細(xì)胞內(nèi)阿霉素(ADM)積聚濃度及mdr-1/ PgP表達(dá)的影響，結(jié)果表明Nef 能增加MCF-7/ Adr 細(xì)胞內(nèi)ADM 積聚濃度，其機(jī)制可能是通過(guò)降低耐藥人乳腺癌細(xì)胞mdr-1 m RNA 及P-gp 的表達(dá)逆轉(zhuǎn)MDR。

4）甲基蓮心堿對(duì)胃癌的影響：采用MTT比色法檢測(cè)藥物的細(xì)胞毒性作用，并用流式細(xì)胞術(shù)、AOEB 雙重?zé)晒馊旧ê蚑UNEL 法研究了甲基蓮心堿對(duì)長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞凋亡率與抑制人胃癌細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明甲基蓮心堿能增強(qiáng)長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞凋亡。推測(cè)其為一種低毒高效的化療增敏劑。

5）甲基蓮心堿對(duì)肝癌的影響：采用MTT法，PI 染色流式細(xì)胞儀，間接免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)探討耐熱肝癌細(xì)胞能否對(duì)阿霉素(ADR)產(chǎn)生耐受性，以及甲基蓮心堿(Nef)能否逆轉(zhuǎn)耐熱肝癌細(xì)胞的阿霉素耐藥性，結(jié)果表HepG2/thermotolerance 細(xì)胞對(duì)ADR 可產(chǎn)生耐受性，Nef 可逆轉(zhuǎn)HepG2/ thermotolerance 細(xì)胞對(duì)ADR 的耐受性.其機(jī)制可能與其下調(diào)HepG2/ thermotolerance 細(xì)胞Bcl-2 蛋白表達(dá)有關(guān)。

6）甲基蓮心堿對(duì)白血病的影響：采用MTT法，RT-PCR 法研究甲基蓮心堿(Nef)在多藥耐藥白血病細(xì)胞K562/A02 對(duì)STI571 敏感性中的作用，并探討其逆轉(zhuǎn)耐藥的機(jī)制，結(jié)果表明甲基蓮心堿能增強(qiáng)K562/ A02 細(xì)胞對(duì)S TI 57l的敏感性，下調(diào)其mdr/ mRNA 的轉(zhuǎn)錄和阻斷P-gp 的表達(dá)，從而逆轉(zhuǎn)白血病的多藥耐藥性。

以急性難治/ 復(fù)發(fā)白血病患者為研究對(duì)象，采用M TT 法及免疫細(xì)胞化學(xué)SABC 法探討甲基蓮心堿(Nef)對(duì)耐藥白血病細(xì)胞增殖及P-g p 表達(dá)的影響，結(jié)果表明Nef 能抑制耐藥白血病細(xì)胞增殖。Nef 通過(guò)降低耐藥白血病細(xì)胞Pgp 的表達(dá)逆轉(zhuǎn)MDR。

7)甲基蓮心堿的增強(qiáng)癌癥細(xì)胞的敏感性的機(jī)理研究：采用MTT 法，采用RT-PC R 和Western 印跡法，探討甲基蓮心堿(Nef)聯(lián)合mdr-1shRNA 表達(dá)的載體對(duì)K562/ A02細(xì)胞mdr/P-gP 表達(dá)的影響，甲基蓮心堿能增強(qiáng)mdr-lshRNA表達(dá)載體對(duì)K562/ A02 細(xì)胞的增殖抑制作用及mdr-l/ P-gP 表達(dá)的抑制作用，逆轉(zhuǎn)mdr-J 基因編碼蛋白P-gp 介導(dǎo)的多藥耐藥。

2. 甲基蓮心堿對(duì)血脂與血管的影響　

甲基蓮心堿能夠降低血脂，清除自由基，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化，防止動(dòng)脈粥樣硬化的作用。甲基蓮心堿高、低劑量組絕對(duì)和相對(duì)肝重更低，血清TC 、TG、LDI-C 水平顯著降低，HDLC、GSH-Px 、SOD 水平顯著升高，血清和肝臟中MDA 的含量顯著降低。

進(jìn)而認(rèn)為甲基蓮心堿具有血脂和提高機(jī)體抗氧化能力的作用，對(duì)于防止高脂血癥誘發(fā)的動(dòng)脈粥樣硬化等病變有較重要的意義。另外研究表明Nef 可顯著抑制o xLDL 誘導(dǎo)VSMC 的脂質(zhì)堆積和增殖。

3.甲基蓮心堿對(duì)成纖維細(xì)胞的影響

探討甲基蓮心堿(Nef)對(duì)體外培養(yǎng)的增生性瘢痕成纖維細(xì)胞(HSFBs)整合素(integrin)β1 和integ rinα3亞型m RNA 表達(dá)的影響。結(jié)果顯示10μg·m L-1 Nef 組、20μg· m L-1 Nef 組和20μg · m L-1 維拉帕米(Ver ) 組HSFBsintegrinβ3 m RNA 表達(dá)水平均明顯低于對(duì)照組(均P <0.01)，20μg·m L-1 Ver 組HSFBs integrinβ1 mRNA 表達(dá)水平與10μg·m L-1，Nef 組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05)，5μg·m L-1 Nef 組HSFBs integ rinβ1 mRNA 表達(dá)水平與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

10μg·mL-1 Nef 組、20μg·mL -1 Nef 組HSFBs integ rinα3 m RNA 表達(dá)水平均明顯低于對(duì)照組，5μg·mL-1 Nef 組、20μg·mL-1 Ver 組HSFBs integrinα3 m RNA 表達(dá)水平與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，10μg·mL -1 Nef HSFBsintegrinα3 。mRNA 表達(dá)水平與20μg·mL-1Nef 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所以，Nef 以濃度依賴方式抑制HSFBsintegrinβ1 m RNA 和integ rinα3 mRNA 的表達(dá)。

4.甲基蓮心堿對(duì)膽堿脂酶的激活作用

研究甲基蓮心堿對(duì)敵敵畏抑制膽堿脂酶的毒理動(dòng)力學(xué)研究，并尋找甲基蓮心堿體內(nèi)和體外活化效應(yīng)的相關(guān)性，結(jié)果表明由灌胃注射敵敵畏12.5mg·kg -1的中毒家兔，甲基蓮心堿對(duì)敵敵畏的毒理動(dòng)力學(xué)幾乎沒有影響。在由甲基蓮心堿7.5mg·kg-1和解磷定50mg·kg-1處理的家兔組，與未處理組相比，其抑制膽堿酯酶的毒理動(dòng)力學(xué)的曲線斜率增加了三倍。

體外實(shí)驗(yàn)表明，甲基蓮心堿使敵敵畏對(duì)膽堿酯酶的抑制效應(yīng)曲線向右轉(zhuǎn)移且差異具有顯著性。體外實(shí)驗(yàn)表明甲基蓮心堿使敵敵畏對(duì)膽堿脂酶的濃度效應(yīng)曲線向右移，明顯的減少了最大的抑制效應(yīng)。甲基蓮心堿使敵敵畏對(duì)膽堿脂酶的濃度效應(yīng)曲線移動(dòng)傾向在體外與體內(nèi)的效應(yīng)相似，b 值的差異無(wú)顯著性意義。進(jìn)而得出甲基蓮心堿能激活被敵敵畏抑制的膽堿酯酶的活性，體外實(shí)驗(yàn)可以作為一個(gè)初步的指標(biāo)去觀察被抗膽堿脂酶抑制的膽堿脂酶的激活效應(yīng)。

藥代動(dòng)力學(xué)研究

研究甲基蓮心堿(Nef)在大鼠肝微粒體系的代謝特性，探明參與Nef 代謝的CYP450 亞酶種類及其在Nef代謝中的作用。Nef 在DEX 誘導(dǎo)下大鼠肝微粒體溫孵液中的代謝較未誘導(dǎo)的對(duì)照組明顯加快，其Nef 代謝率與對(duì)照組相比差異有顯著性，可見CYP3A 亞酶介導(dǎo)了Nef的代謝轉(zhuǎn)化。而CYP1A 誘導(dǎo)劑B-NF 對(duì)Nef 在大鼠肝微粒體溫孵液中的代謝卻未產(chǎn)生任何影響，這提示CYP1A 可能并未參與Nef 的生物轉(zhuǎn)化過(guò)程。

對(duì)大鼠灌胃給予甲基蓮心堿20mg·kg -1，采用液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法，高效液相色譜一紫外檢測(cè)法研究了甲基蓮心堿在大鼠肝臟中代謝產(chǎn)物及其途徑。在正離子檢測(cè)方式下，除甲基蓮心堿外共檢測(cè)到4 種代謝產(chǎn)物M1 、M2(主要代謝產(chǎn)物)、M3 和M4 。其中，M2 和M4 通過(guò)與對(duì)照品的色譜和質(zhì)譜比對(duì)，確認(rèn)為蓮心堿和異蓮心堿，而M1 和M3可能為去甲基蓮心堿和去甲基異蓮心堿。

CYP3AI 的特異性抑制劑酮康唑和CYP2DI 的特異性抑制劑奎尼丁均可抑制甲基蓮心堿在肝微粒體溫孵液中的代謝，其主要代謝產(chǎn)物蓮心堿的生成抑制率分別為25.7 %和80.5 %。說(shuō)明CYP2D1 和CYP3A1 均參與了甲基蓮心堿轉(zhuǎn)化為蓮心堿的反應(yīng)，甲基蓮心堿的代謝以O(shè)-脫甲基化為主，由CYP2D1 催化CYP3A1 也部分參與了該反應(yīng)，這與姜敏等的研究結(jié)果一致。

主要參考資料

[1] 甲基蓮心堿的藥理作用研究進(jìn)展

[2] 甲基蓮心堿的藥理作用