124832-26-4/伐昔洛韋的制備

背景及概述^[1][2]

伐昔洛韋是阿昔洛韋的L-纈氨酰酯前藥。阿昔洛韋是天然核苷的無(wú)環(huán)類似物，被發(fā)現(xiàn)具有高抗病毒活性。阿昔洛韋廣泛用于治療與預(yù)防人類病毒感染，尤其是皰疹族病毒引起的感染，參見(jiàn)Goodman和Gilman的ThePharmacologicalBasisofTherapeutics1193-1198(第9版，1996)。美國(guó)食品與藥物管理局已批準(zhǔn)伐昔洛韋用于治療帶狀皰疹和生殖皰疹。

鹽酸伐昔洛韋是市售的，對(duì)于口服給藥，給予伐昔洛韋而非阿昔洛韋則是更有利的；因?yàn)椴坏趧?dòng)物中而且在人中，由胃腸道吸收的阿昔洛韋很少。比較起來(lái)，伐昔洛韋在口服后，迅速被胃腸道吸收。

鹽酸伐昔洛韋是阿昔洛韋的前體藥物，口服后吸收迅速并在體內(nèi)很快轉(zhuǎn)化為阿昔洛韋，其抗病毒作用為阿昔洛韋所發(fā)揮，藥物被磷酸化成活化型無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷三磷酸酯，與脫氧核苷競(jìng)爭(zhēng)病毒胸腺嘧啶激酶或細(xì)胞激酶，與脫氧鳥(niǎo)嘌呤三磷酸酯競(jìng)爭(zhēng)病毒DNA多聚酶，從而抑制了病毒DNA合成，顯示抗病毒作用。此外，在口服給藥后，伐昔洛韋在健康成人體內(nèi)被迅速轉(zhuǎn)化為阿昔洛韋。有人認(rèn)為伐昔洛韋的轉(zhuǎn)化起因于第一關(guān)卡腸和肝臟由于酶促水解而代謝。

理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)^[1]

伐昔洛韋的化學(xué)名稱為1-纈氨酸，2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯。(CAS登記號(hào)124832-26-4)。伐昔洛韋目前以VALTREX商標(biāo)在市場(chǎng)上銷售。伐昔洛韋的化學(xué)結(jié)構(gòu)如結(jié)構(gòu)式I所示：

結(jié)構(gòu)式I

檢測(cè)方法^[3]

一種高效液相色譜測(cè)定伐昔洛韋含量的方法，包括以下步驟：

1)準(zhǔn)確稱取25mg待測(cè)樣品，置50ml量瓶中，加20ml甲醇溶解，然后用流動(dòng)相A稀釋并定容，得到供試品溶液，供試品溶液配制兩組，即供試品溶液1和供試品溶液2，同時(shí)做空白試驗(yàn)；

2)準(zhǔn)確稱取25mg對(duì)照品，置50ml量瓶中，加20ml甲醇溶解，然后用流動(dòng)相A稀釋并定容，得到對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液配制兩組，即對(duì)照品溶液1和對(duì)照品溶液2；

3)采用高效液相色譜分別對(duì)供試品溶液和對(duì)照品溶液進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)條件為：

色譜柱：C18柱；

柱溫：25℃；

檢測(cè)波長(zhǎng)：251nm。

流動(dòng)相：

流動(dòng)相A0.01mol/L的磷酸二氫鉀溶液與甲醇的混合溶液，體積比為80:20；

流動(dòng)相B0.01mol/L的磷酸二氫鉀溶液與甲醇的混合溶液，體積比為25:75；

具體梯度洗脫參數(shù)見(jiàn)表1：

表1

理論塔板數(shù)根據(jù)供試品進(jìn)行計(jì)算，不低于5000。

按照上述條件，分別對(duì)供試品溶液和對(duì)照品溶液進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣量為20μl，調(diào)節(jié)色譜系統(tǒng)及檢測(cè)靈敏度，記錄色譜圖，每種溶液分別進(jìn)樣2次，其中供試品溶液1的色譜圖如圖1-2所示，供試品溶液2的色譜圖如圖3-4所示，對(duì)照品溶液1的色譜圖如圖5-6所示，對(duì)照品溶液2的色譜圖如圖7-8所示，空白溶液的色譜圖如圖9所示，最后按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，得到供試品中伐昔洛韋含量。

具體計(jì)算公式是：

伐昔洛韋含量＝(對(duì)照品質(zhì)量*供試品峰面積)/(對(duì)照品峰面積*供試品質(zhì)量)

該實(shí)施例中，對(duì)照品質(zhì)量1為：24.8mg，對(duì)照品質(zhì)量2為：24.5mg，供試品質(zhì)量1為25.6mg，供試品質(zhì)量2為25.1mg，對(duì)照品峰面積1為17324.7,17320.8，對(duì)照品峰面積2為17113.7,17105.0；供試品峰面積1為17486.9,17487.7，供試品峰面積2為17059.6,17069.7；

每組計(jì)算伐昔洛韋含量，最后計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差；伐昔洛韋含量平均值為97.5％。RSD為0.27％。

制備^[2]

1.N-t-BOC-伐昔洛韋(N-叔丁氧羰基-L-纈氨酸2-[(2-氨基-1，6-二氫-6-氧代-9H-嘌呤-9-基)甲氧基]乙酯)

將N-t-BOC-L-纈氨酸(2.9g，13.2mmol)、阿昔洛韋(2.3g，10mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(3.0g，15mmol)、4-(二甲氨基)吡啶(0.2g，1.6mmol)和三乙胺(1.4g，13.9mmol)在二甲基甲酰胺(15ml)中的懸浮液在約0℃下攪拌約4小時(shí)，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。向該反應(yīng)混合物中加入追加量的N-t-BOC-L-纈氨酸(0.3g，1.36mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.3g，1.5mmol)，然后繼續(xù)攪拌過(guò)夜。把0.3N鹽酸溶液(53ml)在約0℃下加入到澄清溶液中，得到白色沉淀，然后將所得懸浮液在約0℃下攪拌約1小時(shí)。濾出沉淀并減壓干燥，得到N-t-BOC-伐昔洛韋(4.1g，97％)，經(jīng)HPLC測(cè)定，其純度為98.2％。

2.由N-t-BOC-伐昔洛韋制備鹽酸伐昔洛韋

向溶于水(22ml)的N-t-BOC-伐昔洛韋(9.0g，21mmol)懸浮液中滴加12N鹽酸溶液(8ml，96mmol)，然后將其在室溫下攪拌約3.5小時(shí)，在這段時(shí)間內(nèi)，該懸浮液消失而形成混濁溶液。把該溶液冷卻至約0℃，將其與異丙醇(500ml)混合，此后，形成沉淀。將所得懸浮液在約0℃下攪拌約1小時(shí)，然后在約4℃下保持過(guò)夜。濾出白色沉淀并于約40-50℃減壓干燥至恒重，得到鹽酸伐昔洛韋(7.0g，92％)，經(jīng)HPLC測(cè)定，其純度為97.9％。

將鹽酸伐昔洛韋(2.0g)與乙醇(100ml)一起在回流條件下研磨約1小時(shí)，然后冷卻至室溫。濾出白色沉淀并于約40-50℃減壓干燥至恒重，得到鹽酸伐昔洛韋(1.3g，65％)，經(jīng)HPLC測(cè)定，其純度為99.27％。

3.伐昔洛韋

在約20-25℃，向溶于水(22ml)的N-t-BOC-伐昔洛韋(9.0g，21mmol，1當(dāng)量)漿液中滴加12N鹽酸溶液(8.0ml，96mmol，4.6當(dāng)量)，然后在同樣的溫度下攪拌約3.5小時(shí)。在這段時(shí)間內(nèi)，所得漿液消失而形成油狀溶液。在約0-5℃，向攪拌的溶液中加入異丙醇(500ml)。將所得懸浮液在同樣的溫度下攪拌過(guò)夜。濾出沉淀固體并于約20-30℃減壓干燥至恒重，得到鹽酸伐昔洛韋(7.0g，92％)，經(jīng)HPLC測(cè)定，其純度為97.93％；二環(huán)己基脲＜0.1％，而未反應(yīng)的N-t-BOC-纈氨酸在約0.1％和0.2％之間(通過(guò)薄層色譜(TLC)估計(jì))。

將鹽酸伐昔洛韋(2.0g)與乙醇(100ml)一起在回流條件下攪拌約1小時(shí)，然后在室溫下攪拌約30分鐘。將該懸浮液過(guò)濾并于約40℃減壓干燥，得到伐昔洛韋(1.3g，65％)，經(jīng)HPLC測(cè)定，其純度為99.27％。

主要參考資料

[1]王麗, & 何柱裕. (2007). 伐昔洛韋治療帶狀皰疹52例臨床觀察. 山東醫(yī)藥, 47(25), 51-51.

[2]葉興東, & 張錫寶. (2007). 阿昔洛韋和伐昔洛韋的臨床應(yīng)用及其安全性研究進(jìn)展. 中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志, 23(8), 705-707.

[3]鄭桂香, 張玉, & 余蘭. (2013). 伐昔洛韋聯(lián)合干擾素治療帶狀皰疹的療效觀察. 廣東醫(yī)學(xué), 34(23), 3660-3661.