1391054-00-4 / 羥基氯地那非的篩查方法

背景及概述^[1]

羥基氯地那非是一種抗疲勞類非法添加化合物。保健食品非法添加是指在保健食品中添加未在配方中申報(bào)的品種，比如在減肥類食品中添加西布曲明、酚酞、呋塞米等。由于大多化學(xué)藥均是有一定的副作用(化學(xué)藥的說明書上都有標(biāo)注)，尤其在超量使用后可能會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的后果，比如藥物依賴、器官損傷，甚至器官衰竭等后果，故化學(xué)藥在保健食品中是禁用的。

篩查方法^[1]

(1)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

準(zhǔn)確稱取羥基氯地那非標(biāo)準(zhǔn)品適量于10mL容量瓶中，用甲醇或者50％乙腈水溶液溶解并稀釋至刻度，制備得到各化合物的標(biāo)準(zhǔn)貯備液；對于難溶化合物使用二氯甲烷或者鹽酸甲醇(1:99)溶液使其溶解后定容至刻度；

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(1μg/mL)：分別準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量置于10mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；臨用新制；

(2)待測樣品的供試品溶液制備

1)固態(tài)或半固態(tài)試樣

取固態(tài)試樣(蛋白粉、牡蠣粉、餅干、糖果、咖啡及含與上述基質(zhì)相同的保健食品及片劑、膠囊等劑型)適量混勻，研細(xì)，或取半固態(tài)試樣(果凍)適量混勻，精密稱取1g(精確至0.001g)置于50mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲提取15min，放冷至室溫，用甲醇定容，轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，4 000r/min離心5min，上清液經(jīng)微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，根據(jù)實(shí)際濃度用乙腈水溶液(1+1)適當(dāng)稀釋，備用；

2)液態(tài)試樣

取試樣(飲料、酒)適量搖勻，準(zhǔn)確吸取1mL置于50mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲提取15min，放冷至室溫，用甲醇定容，經(jīng)微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，根據(jù)實(shí)際濃度用乙腈水溶液(1+1)適當(dāng)稀釋，備用；

3)油脂基質(zhì)(軟膠囊)試樣

取試樣(軟膠囊)適量混勻，精密稱取1g(精確至0.001g)置于50mL容量瓶中，加乙酸乙酯5mL，振搖，使其分散，加甲醇適量，超聲提取15min，放冷至室溫，用甲醇定容，轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，4 000r/min離心5min，上清液經(jīng)微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，根據(jù)實(shí)際濃度用乙腈水溶液(1+1)適當(dāng)稀釋，備用；

4)空白基質(zhì)提取液

稱取空白試樣適量，與試樣同法處理，制得空白基質(zhì)提取液；

5)空白溶液

不加試樣，與試樣同法處理，制得空白溶液；

(3)數(shù)據(jù)庫建立

將上述羥基氯地那非的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，注入超高效液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀進(jìn)行測定，采集得到各化合物的原始數(shù)據(jù)圖譜及總離子流圖；

將采集得到的原始數(shù)據(jù)從masslynx軟件中導(dǎo)出，導(dǎo)入到unifi數(shù)據(jù)處理軟件中進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到的保留時(shí)間、母離子及子離子質(zhì)譜圖，并根據(jù)碎片斷裂機(jī)理及斷裂難度，確定特征碎片離子；

(4)定性分析

1)對經(jīng)過步驟(2)所述方法處理的待測樣品進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜分析，將得到的結(jié)果與數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，空白溶劑不能出現(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的離子峰，試樣色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間一致，容許偏差為±0.1min，試樣的母離子及特征碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)溶液的一致，偏差均應(yīng)小于等于0.05Da，母離子與碎片離子色譜峰的信噪比(S/N)都在3:1以上，信噪比以峰對峰(PtP)計(jì)算，全掃描光譜記錄時(shí)，試樣中特征碎片離子的相對豐度必須超過標(biāo)準(zhǔn)溶液參照的特征離子光譜豐度的10％，篩選出滿足定性條件的化合物，即為疑似陽性樣品；

2)對于疑似陽性樣品，根據(jù)化合物的保留時(shí)間和分子量編輯MSMS方法，并采集數(shù)據(jù)，所得到的疑似物質(zhì)的子離子掃描質(zhì)譜圖，與標(biāo)準(zhǔn)溶液的子離子掃描質(zhì)譜圖進(jìn)行比較，在相同的條件和相近的濃度下，試樣中主要碎片離子相對豐度與標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對豐度的允許偏差不超過規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應(yīng)的待測物。

參考文獻(xiàn)

[1] [中國發(fā)明] CN202010542102.1 一種保健食品中非法添加化合物的篩查方法