14534-61-3 / 異綠原酸B的應(yīng)用介紹

背景及概述^[1]

金銀花LoniceraeFlos為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或初開的花，是我國(guó)常用中藥，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效、常用于熱血毒痢、風(fēng)熱感冒、癰腫疔瘡、瘟病發(fā)熱等疾病。金銀花中含有大量的有機(jī)酸類化合物，主要藥理活性有抗菌作用、抗炎、抑制血小板聚集、抗血栓、抗氧化作用等。

異綠原酸A、B和C是二咖啡?？鼘幩犷惢衔?，是金銀花中的有效活性成分，是一類由奎寧酸與數(shù)目不等的咖啡酸通過(guò)酯化反應(yīng)縮合而成的有機(jī)酸類天然成分，廣泛存在于植物界中。近20年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者就二咖啡?？鼘幩犷惖闹参锘瘜W(xué)和藥理進(jìn)行了深入研究，發(fā)現(xiàn)其具有一些重要生物活性，極具臨床應(yīng)用價(jià)值。主要的藥理活性有抗氧化、抑制氧酶、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗血小板活性物質(zhì)、調(diào)血脂、抗炎、抗病毒、抑制組胺釋放、抗纖維化、抑制平滑肌收縮等作用。異綠原酸B（isochlorogenicacidB，ICAB），又名3，4-二咖啡?？鼘幩幔菑乃幱弥参锝疸y花中提取的一種多酚類化合物。異綠原酸B是雙黃連口服液的成分之一，同時(shí)也是存在于熱毒寧注射液中的抗氧化物質(zhì)。目前，關(guān)于異綠原酸B的藥理學(xué)研究較少。已有研究證實(shí)異綠原酸B具有抗氧化、保肝和抗神經(jīng)退行性疾病的生物活性。此外，分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)表明，異綠原酸B可能是磷酸二酯酶-5（phosphodiesteras-5，PDE-5）受體的強(qiáng)力抑制劑。

應(yīng)用^[1]

異綠原酸B與綠原酸相比具有更多的酚羥基，被證實(shí)比綠原酸具有更好的抗氧化和抗神經(jīng)退行性疾病的藥理作用。有實(shí)驗(yàn)研究異綠原酸B（異綠原酸B）對(duì)四氯化碳（CCl4）致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。建立CCl4誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ筒⒃u(píng)價(jià)異綠原酸B的保護(hù)作用，測(cè)定小鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平和肝組織丙二醛（MDA）含量，以及超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）的活性。采用HE染色對(duì)肝組織細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察；Western印跡法測(cè)定異綠原酸B對(duì)肝損傷小鼠肝細(xì)胞中核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）、血紅素氧合酶-1（HO-1）和醌氧化物還原酶1（NQO1）表達(dá)的影響。結(jié)果顯示異綠原酸B各給藥組（5、10和20mg/kg）均可不同程度抑制CCl4所致小鼠血清ALT、AST和MDA的升高（P＜0.01），異綠原酸B高劑量組（20mg/kg）明顯提高肝細(xì)胞中SOD（P＜0.01）和GSH-Px活性水平（P＜0.05），降低MDA含量。同時(shí)，異綠原酸B能改善CCl4造成的肝組織病理學(xué)損傷。此外，異綠原酸B可促進(jìn)Nrf2的表達(dá)及Nrf2的核轉(zhuǎn)位，進(jìn)而促進(jìn)Nrf2下游靶蛋白HO-1和NQO1的表達(dá)。因此異綠原酸B對(duì)CCl4引起的小鼠急性肝損傷具有明顯的保肝降酶作用，其作用機(jī)制可能與參與調(diào)節(jié)Nrf2信號(hào)通路、緩解氧化應(yīng)激相關(guān)。

此外，研究表明異綠原酸A、B、C抑制人外周血多形核白細(xì)胞中鈣離子A23187誘導(dǎo)的白三烯B4產(chǎn)生，并且異綠原酸B能促進(jìn)前列腺素E2的形成，呈現(xiàn)較好的抗炎活性。

制備^[2]

取金銀花10.0kg，用10倍量70%乙醇回流提取2h，濾渣加8倍量70%乙醇回流提取1h，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度1.05（25℃）。攪拌加入乙醇至體積分?jǐn)?shù)為80%，靜置過(guò)夜（12h），濾過(guò)，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，加水稀釋至1∶1，靜置過(guò)夜（12h），濾過(guò)，棄去不溶物，即得金銀花提取液，備用。異綠原酸A、B和C的轉(zhuǎn)移率為92.6%。將乙腈溶液作為A相，0.5%甲酸水溶液為B相，將2個(gè)灌注管路分別放入A相和B相中，然后進(jìn)入洗脫程序表按照優(yōu)選的溶劑體系比例進(jìn)行設(shè)定（A相32%，B相68%），時(shí)間30min，體積流量20mL/min，再進(jìn)入紫外檢測(cè)器的選擇系統(tǒng)，設(shè)定波長(zhǎng)為326nm。將自制C18填料色譜柱（400mm×80mm，50μm）安裝好，取“2.3.3”項(xiàng)下異綠原酸粗品30.0g，用適量甲醇溶解，分次進(jìn)樣，按上述條件洗脫，并收集保留時(shí)間為10.8～12.5、14.2～16.8和18.5～22.0min的組分，減壓濃縮收集液，冷凍干燥，并計(jì)算收率（收率＝制備得到的目標(biāo)成分量/粗品中目標(biāo)成分量）得異綠原酸A白色粉末4.08g（收率為86.6%）、異綠原酸B白色粉末2.03g（收率為81.5%）和異綠原酸C白色粉末8.17g（收率為88.1%）

主要參考資料

[1] 異綠原酸B對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

[2] 異綠原酸A、B和C的制備工藝研究