急性冠脈綜合征（ＡＣＳ）嚴(yán)重危害人類健康，應(yīng)用抗血小板藥物是治療的關(guān)鍵步驟之一。血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受體是血小板血栓形成的最終共同路徑，阻斷這一受體即可有效地抑制各種誘導(dǎo)劑激發(fā)的血小板聚集，其拮抗劑成為一類新的、強(qiáng)效的、更合理的治療缺血性心臟病的藥物。大量循證醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，血小板糖蛋白ＧＰⅡｂ／Ⅲａ受體拮抗劑能顯著改善ＡＣＳ和經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)（ＰＣＩ）患者的臨床預(yù)后，明顯降低ＡＣＳ患者的死亡率和心血管不良事件的發(fā)生率。血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受體拮抗劑類藥物已開(kāi)發(fā)很多，目前國(guó)際上可用于臨床的有３種制劑，阿昔單抗、依替巴肽和替羅非班。國(guó)內(nèi)關(guān)于血小板糖蛋白ＧＰⅡｂ／Ⅲａ受體拮抗劑的使用經(jīng)驗(yàn)甚少，可供使用的藥物也非常有限，僅有１種藥物即鹽酸替羅非班上市，因而開(kāi)發(fā)新的血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受體拮抗劑勢(shì)在必行。國(guó)產(chǎn)酸埃依非巴肽是成都圣諾生物制品有限公司生產(chǎn)的一個(gè)血小板糖蛋白Ⅱｂ／Ⅲａ受體拮抗劑，本文研究國(guó)產(chǎn)酸埃依非巴肽體內(nèi)、體外對(duì)犬血小板聚集的抑制作用及作用特點(diǎn)，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

酸埃依非巴肽制備如下：

1）Boc-Pro-Cys(acm)-NH2的合成

在50毫升的圓底燒瓶中加入Boc-Pro-OH(1.076g)，NH2-Cys(acm)-NH2(0.960g)，HOSU(N-羥基琥珀酰亞胺)(0.575g)，用無(wú)水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室溫下攪拌2小時(shí)，檢測(cè)反應(yīng)完全。抽濾除去反應(yīng)產(chǎn)生的沉淀，減壓濃縮除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用10％NaHCO3、15％稀鹽酸、飽和食鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干乙酸乙酯，得到固體1.760g。HPLC純度：大于92％，收率為90.5％MS＝389(M+1)。

2）Boc-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2的合成

稱取Boc-Pro-Cys(acm)-NH2(1.945g)置于50毫升的圓底燒瓶中加入6mol/L的HCl/THF溶液20毫升，在室溫下反應(yīng)30分鐘，檢測(cè)反應(yīng)完全，減壓濃縮除去HCl/THF溶液，殘留物中加入乙酸乙酯溶解，再減壓濃縮除去乙酸乙酯，如此重復(fù)數(shù)次，直到除盡HCl。在50毫升的圓底燒瓶中加入Boc-Trp-OH(1.515g)，NH2-Pro-Cys(acm)-NH2(1.445g)，HOSU(0.575g)，用無(wú)水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室溫下攪拌2小時(shí)，檢測(cè)反應(yīng)完全。抽濾除去反應(yīng)產(chǎn)生的沉淀，減壓濃縮除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用NaHCO3、稀鹽酸、飽和食鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干乙酸乙酯，得到固體2.507g。HPLC純度：大于93％，收率為87％MS＝576(M+1)。

3）Boc-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2的合成

稱取Boc-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2(2.880g)置于50毫升的圓底燒瓶中加入6mol/L的HCl/THF溶液20毫升，在室溫下反應(yīng)30分鐘，檢測(cè)反應(yīng)完全，減壓濃縮除去HCl/THF溶液，殘留物中加入乙酸乙酯溶解，再減壓濃縮除去乙酸乙酯，如此重復(fù)數(shù)次，直到除盡HCl。在50毫升的圓底燒瓶中加入Boc-Asp(OBzl)-OH(1.615g)，NH2-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2(2.380g)，HOSU(0.575g)，用無(wú)水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室溫下攪拌2小時(shí)，檢測(cè)反應(yīng)完全。抽濾除去反應(yīng)產(chǎn)生的沉淀，減壓濃縮除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用NaHCO3、稀鹽酸、飽和食鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干乙酸乙酯，得到固體3.315g。HPLC純度：大于93％，收率為83％MS＝782(M+1)。

4）Boc-Har-Gly-Ome的合成

在50毫升的圓底燒瓶中加入Boc-Har-OH(1.440g)，NH2-Gly-Ome(0.445g)，HOSU(0.575g)，用無(wú)水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室溫下攪拌2小時(shí)，檢測(cè)反應(yīng)完全。抽濾除去反應(yīng)產(chǎn)生的沉淀，減壓濃縮除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用NaHCO3、稀鹽酸、飽和食鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干乙酸乙酯，得到固體1.687g。HPLC純度：大于95％，收率為94％MS＝359(M+)

5）Mpr(acm)-Har-Gly-Ome的合成

稱取Boc-Har-Gly-Ome(1.795g)置于50毫升的圓底燒瓶中加入6mol/L的HCl/THF溶液20毫升，在室溫下反應(yīng)30分鐘，檢測(cè)反應(yīng)完全，減壓濃縮除去HCl/THF溶液，殘留物中加入乙酸乙酯溶解，再減壓濃縮除去乙酸乙酯，如此重復(fù)數(shù)次，直到除盡HCl。在50毫升的圓底燒瓶中加入Mpr(acm)-OH(0.585g)，NH2-Har-Gly-Ome(1.295g)，HOSU(0.575g)，用無(wú)水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室溫下攪拌2小時(shí)，檢測(cè)反應(yīng)完全。抽濾除去反應(yīng)產(chǎn)生的沉淀，減壓濃縮除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用NaHC03、稀鹽酸、飽和食鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干乙酸乙酯，得到固體1.490g。HPLC純度：大于92％，收率為83％MS＝359(M+)

6）Mpr(acm)-Har-Gly-OH的合成

稱取Mpr(acm)-Har-Gly-Ome(1.795g)置于50毫升的圓底燒瓶中加入2mol/L的NaOH/THF溶液20毫升，在室溫下反應(yīng)30分鐘，檢測(cè)反應(yīng)完全，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH＝6，出現(xiàn)大量白色沉淀，過(guò)濾，用無(wú)水乙醚固化，得到白色粉末Mpr(acm)-Har-Gly-OH，質(zhì)量為1.466g。HPLC純度：大于91，收率為85MS＝345(M+)

7）Mpr(acm)-Har-Gly-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2的合成

稱取Boc-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2(3.995g)置于50毫升的圓底燒瓶中加入6mol/L的HCl/THF溶液20毫升，在室溫下反應(yīng)30分鐘，檢測(cè)反應(yīng)完全，減壓濃縮除去HCl/THF溶液，殘留物中加入乙酸乙酯溶解，再減壓濃縮除去乙酸乙酯，如此重復(fù)數(shù)次，直到除盡HCl。在50毫升的圓底燒瓶中加入Mpr(acm)-Har-Gly-OH(1.725g)，NH2-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2(3.495g)，HOSU(0.575g)，用無(wú)水DMF40毫升溶解，在冰水浴下加入DCC(1.030g)后，在室溫下攪拌12小時(shí)，檢測(cè)反應(yīng)完全。抽濾除去反應(yīng)產(chǎn)生的沉淀，減壓濃縮除去DMF，之后用大量乙酸乙酯溶解，依次用NaHCO3、稀鹽酸、飽和食鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干乙酸乙酯，得到固體3.902g。HPLC純度：大于87％，收率為76％MS＝1010(M+1)

當(dāng)Mpr(X)-Har(R4)-Gly-Asp(R2)-Trp(R3)-Pro-Cys(Y)-NH2側(cè)鏈保護(hù)基，與實(shí)施例中一致時(shí)，既可以采用步驟a來(lái)脫除，也可以采用步驟b來(lái)脫除。當(dāng)側(cè)鏈保護(hù)基都能用強(qiáng)酸脫除時(shí)，則直接采用步驟2脫除。實(shí)施例Mpr(acm)-Har-Gly-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2合成之后，去側(cè)鏈保護(hù)基，采用步驟1：

a、稱取Mpr(acm)-Har-Gly-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2(5.135g)置于50毫升的圓底燒瓶中加入20毫升甲醇，加入10％Pd/C(0.1g)，通入氫氣致0.03MP，然后在15℃-30℃之間氫化還原24小時(shí)，檢測(cè)反應(yīng)完全。濾除10％Pd/C，減壓濃縮除去甲醇，得到油狀物，用無(wú)水乙醚固化，得到白色固體產(chǎn)品Mpr(acm)-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(acm)-NH24.416g。HPLC純度：大于96％，收率為96％MS＝920(M+1)

b、將帶側(cè)鏈保護(hù)的Mpr(acm)-Har-Gly-Asp(OBzl)-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2線性肽(4.600g)溶解于二甲硫醚3毫升、苯甲醚3毫升、三氟甲磺酸和三氟乙酸(體積比4∶1)12毫升的混合溶液中，在室溫下反應(yīng)1小時(shí)，加入冰乙醚，得到白色固體3.502g(Mpr(acm)-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(acm)-NH2)。HPLC純度：大于90％，收率為84％MS＝920(M+1)

當(dāng)Mpr(X)-Har-G1y-Asp-Trp-Pro-Cys(Y)-NH2中的X和Y都為氫的時(shí)候可以采用步驟A或者步驟B；當(dāng)X和Y為實(shí)施例中的基團(tuán)時(shí)，則采用步驟A：

A、將Mpr(Acm)-Har-Gly-Asp-Trp-Pto-Cys(Acm)-NH2(4.595g)線性肽溶于1.5mmol/ml(I2/MeOH)溶液70毫升中，在室溫下反應(yīng)10～50分鐘，檢測(cè)反應(yīng)完全。得到目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量為3.108g。HPLC純度：大于91％，收率為80％MS＝772(M+)。

B、將Mpr-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH2(3.860g)線性肽溶于70毫升水中，將PH調(diào)至6～9之間，加入雙氧水2.5毫升，在室溫下反應(yīng)10-50分鐘，檢測(cè)反應(yīng)完全。得到目標(biāo)產(chǎn)品酸埃依非巴肽質(zhì)量為3.282g。

本品又稱依非巴特、埃替巴肽，為血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受體可逆性拮抗劑，不良反應(yīng)輕，出現(xiàn)可立即停藥。選擇性高作用強(qiáng)。無(wú)抗原性，不引起過(guò)敏反應(yīng)。適用于急性冠狀動(dòng)脈綜合征、冠狀動(dòng)脈內(nèi)介入治療前和急性Q波性心肌梗死?？删徑獠环€(wěn)定型心絞痛癥狀，減少心血管事件發(fā)生率?？上拗品荙波性心肌梗死范圍，減少穿壁型心肌梗死的發(fā)生。

用于治療急性冠狀動(dòng)脈綜合征，起始量180μg/kg靜脈注射，維持量以每分鐘2μg/kg持續(xù)靜脈滴注72h，如施行急診經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)，術(shù)后持續(xù)靜脈滴注18～24h。用于經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)，起始量180μg/kg靜脈注射，后每分鐘2μg/kg持續(xù)靜脈滴注，10min后再次用180μg/kg靜脈注射，其后以每分鐘2μg/kg持續(xù)靜脈滴注18～24h。

針劑20mg/支(10mL)，75mg/瓶(100mL)，200mg/瓶(100mL)。

[1] 國(guó)產(chǎn)依替巴肽抗犬血小板聚集作用研究

[2] CN200910156804.X一種依替非巴肽的合成制備工藝

[3] 常用新藥精匯手冊(cè)