19356-17-3/骨化二醇的含量測(cè)定和分離純化

背景及概述^[1-2]

骨化二醇(calcifediol)是人體內(nèi)維生素D3(VD3)在肝臟的VD3羥化酶的作用下轉(zhuǎn)化而來，對(duì)空氣、熱、光敏感，易溶于乙醇等極性有機(jī)溶劑，不溶于水。由美國Upjohn公司上世紀(jì)八十年代開發(fā)上市，用于治療老年人骨質(zhì)疏松癥等各種慢性骨紊亂，以及與慢性腎衰竭有關(guān)的代謝性骨病。

維生素D2和D3被吸收后首先經(jīng)肝臟維生素D-25羥化酶系統(tǒng)羥基化為25-羥代謝物，即骨化二醇，然后骨化二醇在腎臟經(jīng)維生素D-Ⅰ羥化酶系統(tǒng)催化，形成1，25-雙羥維生素D3(骨化三醇)，才具有生物活性作用。骨化二醇血藥濃度達(dá)峰時(shí)間約為4小時(shí)，作用持續(xù)時(shí)間為15～20日，腎功能衰竭時(shí)作用時(shí)間延長2～3倍。半衰期為10～22日。

用法用量^[1]

口服：初量，每周0.3～0.35mg，分為每日或隔日1次，需要時(shí)4周后增加用量。一般每日服0.05～0.1mg或隔日服0.1～0.2mg就有療效。血鈣濃度正常病人隔日服0.02mg，即有效。2歲以上小兒口服：每日0.02～0.05mg;2～10歲，每日0.05mg。10歲以上用量可參照成人用量。

含量測(cè)定^[2]

謝洪兵等人報(bào)道了快速準(zhǔn)確地測(cè)定維生素D3微生物轉(zhuǎn)化液中骨化二醇含量的方法。采用依利特HypersilC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),流動(dòng)相為乙腈-水(85∶15),流速2.0mL·min^-1,柱溫50℃,檢測(cè)波長265nm,外標(biāo)法定量。結(jié)果：骨化二醇在10.1~2020μg·mL^-1內(nèi)呈良好線性關(guān)系,r=0.9999,定量限0.6ng,檢出限0.3ng,平均加樣回收率為101.06%(RSD1.44%,n=9)。結(jié)論：該方法簡便,準(zhǔn)確,靈敏度高,分離度好,可用于VD3微生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)中定量骨化二醇的要求。

分離純化^[3]

（1）、在微生物酶催化維生素D3生成骨化二醇（25-羥基維生素D3）轉(zhuǎn)化液中，按照體積比1:1加入乙酸乙酯，震蕩萃取1h，收集上層有機(jī)溶劑，得到骨化二醇提取液a。

（2）、將上述骨化二醇提取液a，經(jīng)過減壓濃縮，回收乙酸乙酯，用甲醇重新溶解濃縮物，調(diào)整骨化二醇濃度在0.5mg/L，得到上柱溶液b。

（3）、瓊脂糖凝膠過濾層析經(jīng)活化后，采用濕法裝柱，將上柱溶液b以2BV/h的流速通過瓊脂糖凝膠過濾層析柱，選用層析分子量為400Da，以1BV的乙酸乙酯做為洗脫液，以2BV/h的流速對(duì)其進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，在60℃，壓力-0.08MPa條件下，減壓濃縮，干燥，得到純度32.1%的骨化二醇產(chǎn)品。

參考文獻(xiàn)

[1]實(shí)用藥物手冊(cè)

[2]謝洪兵,曾志剛,翟龍飛.反相高效液相色譜法測(cè)定維生素D_3微生物轉(zhuǎn)化液中骨化二醇含量[J].中國藥學(xué)雜志,2015,50(01):72-74.

[3] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)] CN201910121462.1 一種新型骨化二醇（25-羥基維生素D3）分離純化方法