23094-69-1 / 柯里拉京的作用

背景及概述^[1][2]

柯里拉京(corilagin，Cor)，1-酰-3，6-六羥基聯(lián)苯二甲?；咸烟?，又稱柯子次鞣素，訶里拉京，鞣(料)云實(shí)精，屬天然植物多酚單寧酸類化合物，為白色針晶粉末，是葉下珠、老鸛草、蜜柑草、白三草等植物中的有效成分，也存在于余甘子、龍眼、橄欖等具有抗氧化抗衰老功效的植物中。研究表明，Cor 具有抗腫瘤、抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗纖溶、降血壓、抑制病毒、抗菌、抗炎等廣泛的生物學(xué)活性，具有很大的藥用價(jià)值，市場(chǎng)前景廣闊，已成為近年來(lái)熱點(diǎn)研究的天然活性成分之一?？吕锢┦侨~下株屬植物的主要活性成分。

近十幾年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)柯里拉京在抗腫瘤、治療心血管疾病等方面具有較高的生物活性，許多富含柯里拉京植物的漫長(zhǎng)藥用史提示柯里拉京的不良反應(yīng)小，是一類應(yīng)用前景廣闊的天然化合物。

但是目前對(duì)柯里拉京的研究還存在許多亟待解決的問(wèn)題如：(1)分離技術(shù)針對(duì)性差：多采用傳統(tǒng)提取方法，分離效果差，很多研究都是柯里拉京與其它多酚的混合物，干擾因素多；(2)柯里拉京研究缺乏深度和廣度：主要停留在提取分離，結(jié)構(gòu)鑒定階段；(3)構(gòu)效關(guān)系、結(jié)構(gòu)修飾及作用制等方面的研究較少，目前僅局限在初步的生物活性研究；(4)對(duì)柯里拉京化學(xué)合成的研究欠缺，目尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)柯里拉京化學(xué)合成的報(bào)道。因此，柯里拉京藥效和機(jī)制的深入研究任重道遠(yuǎn)。

結(jié)構(gòu)

藥理作用^[1][2]

1.抗腫瘤作用

近年來(lái)中草藥有效成分的抗腫瘤活性研究一直是醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，對(duì)于柯里拉京抗腫瘤活性研究的報(bào)道也較多，研究表明柯里拉京對(duì)多種腫瘤有明顯的抑制作用。

體外試驗(yàn)顯示柯里拉京對(duì)人卵巢癌細(xì)胞(A2780)、鼻咽癌細(xì)胞(KB)、骨肉瘤細(xì)胞(OS-732)、人肺腺癌(A549)和人結(jié)腸癌細(xì)胞(HCT-8)等有明顯抑制生長(zhǎng)作用，IC50 分別為0.25，1.2，7.42，8.25，9.08 μg·mL−1；對(duì)人白血病細(xì)胞(HL-60)、T-淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞(Molt-3) 、鼻咽癌上皮細(xì)胞(NPC-BM1)、人成纖維肉瘤(HT1080)、人肝癌細(xì)胞(HepG2)和急性髓系白血病細(xì)胞(K-562)等IC50分別為0.12，0.35，0.81，1.02，1.42，1.53 mg·mL；Cor 對(duì)人胰腺癌細(xì)胞(Bxpc-3)也具有顯著的抑制作用：5 μg·mL48 h 抑制率可達(dá)50%左右，20 μg·mL作用72 h 后抑制率達(dá)80%以上，呈一定的時(shí)間-濃度依賴性。

體內(nèi)研究顯示柯里拉京對(duì)小鼠肝癌H22 具有較明顯的抑制作用，21.5 mg·kg ip×5 抑瘤率為52.70%， 與化療藥環(huán)磷酰胺(CTX)合用可提高到61.45%；對(duì)小鼠P388 淋巴細(xì)胞白血病有一定抑制作用，21.5 mg·kg，ip×13 小鼠生命延長(zhǎng)率為55.3%；對(duì)小鼠路易斯腫瘤、裸鼠移植人OS-732、HCT-8 也顯示出較好的抑制作用。

柯里拉京抗腫瘤的機(jī)制尚未明確，可能有以下幾個(gè)方面：①調(diào)控癌細(xì)胞增殖周期，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡：流式細(xì)胞檢測(cè)，柯里拉京主要阻滯Bxpc-3 于S期，同時(shí)也作用于G2-M，并檢測(cè)到明顯的凋亡峰；②通過(guò)線粒體通路和死亡受體通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡：葉下珠屬Phyllanthus urinaria通過(guò)下調(diào)肺癌細(xì)胞(LLC)、Dalton淋巴腹水癌細(xì)胞(DLA)的抗凋亡蛋白Bcl-2，增加caspase-3活性誘導(dǎo)凋亡，還可上調(diào)Fas受體表達(dá)誘導(dǎo)神經(jīng)酰胺介導(dǎo)的HL-60細(xì)胞凋亡；③對(duì)酶活性的調(diào)節(jié)作用：可抑制人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因、人端粒末端轉(zhuǎn)移酶相關(guān)蛋白1及c-myc mRNA的表達(dá)，降低端粒酶活性，增加人鼻咽癌細(xì)胞(NPC-BM1)的凋亡；④抑制腫瘤細(xì)胞拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ的活性。

2. 心血管保護(hù)作用

柯里拉京在心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用主要集中在其抗高血壓、抗凝降纖作用，抑制血栓形成、預(yù)防缺血再灌注損傷、抑制低密度脂蛋白的氧化等方面。從無(wú)患子科植物Euphoria longanaLam.的種子純化得到逆沒(méi)食子酸鞣質(zhì)Cor，以自發(fā)性高血壓大鼠模型實(shí)驗(yàn)，劑量為5 mg·kg時(shí)與1 mg·kg的胍乙啶作用相當(dāng)；在切除腎上腺大鼠中可劑量依賴性減少血漿中的去甲腎上腺素；此外，還可減弱甲氧明的升壓效應(yīng)，顯示血管活性。減少去甲腎上腺素的釋放和或直接舒張血管起作用可能為其抗高血壓作用機(jī)制。

3. 肝臟保護(hù)作用

清除自由基、抗氧化作用是柯里拉京具有多重生物學(xué)效應(yīng)的重要機(jī)制之一，除對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化外，對(duì)肝炎有著較好的防治作用。在臨床上，以葉下珠為原料的保肝藥“葉下珠片”，“葉下珠膠囊”等有顯著療效?？吕锢┦侵委熞腋蔚拇鏊幦~下珠的有效成分之一，可抑制過(guò)氧化物對(duì)肝臟的損傷。從使君子科植物欖仁樹Terminalia catappa L.樹葉分離到的Cor 具有很強(qiáng)的清除DPPH 和超氧陰離子作用。

腹腔注射Cor預(yù)處理可顯著降低Gal N/LPS 誘導(dǎo)的小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶升高，也減輕了肝線粒體脂質(zhì)過(guò)氧化作用。通過(guò)抑制氧化壓力和凋亡對(duì)抗Gal N/LPS誘導(dǎo)的肝損傷，起保護(hù)作用。葉下珠屬林奈抗氧化組分之一的Cor 可以減輕自由基ROO·對(duì)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的損傷以及·OH 誘導(dǎo)損傷質(zhì)粒DNA 以保護(hù)大鼠肝線粒體。

Phyllanthusurinaria 可劑量依賴性減少蛋氨酸- 膽堿缺乏(MCD)培養(yǎng)的肝細(xì)胞(AML-12 以及原代肝細(xì)胞)脂肪變性，降低ALT；還可減少M(fèi)CD 飲食誘導(dǎo)的小鼠肝脂肪蓄積以及脂肪肝。該作用與抑制肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化水平、減少細(xì)胞色素P450-2E1，TNF-α，IL-6 表達(dá)、減緩JNK 和NF-κB 的激活、增加脂肪分解的細(xì)胞色素P450 (Cyp4a10)的表達(dá)、抑制CCAAT 增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(C/EBPbeta) 的轉(zhuǎn)錄活性相關(guān)。

但Phyllanthus urinaria 對(duì)調(diào)控肝脂肪酸β-氧化的肝乙?；o酶A 氧化酶沒(méi)有影響。結(jié)果提示Phyllanthus urinaria 可通過(guò)抗氧化、抑制炎癥、減緩脂肪蓄積有效減輕脂肪肝。近年來(lái)研究還發(fā)現(xiàn)，葉下珠具有抗乙肝病毒作用。以鴨乙肝病毒逆轉(zhuǎn)錄酶(DHBV RT)為指標(biāo)篩選確定葉下珠提取的有效部位和有效單體，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)其可抑制HBV DNA 復(fù)制，降低鴨血清中DHBVDNA 和DNAp。

但Cor 單體對(duì)肝炎病毒的確切作用尚未明確。有學(xué)者對(duì)Cor進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，以尋找更有效的丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制劑。此外，Cor 可抑制β-葡萄糖苷酸酶呈現(xiàn)保肝作用，葉下珠屬植物Phyllanthus amarus50%甲醇提取物中20 μg·mL−1 與標(biāo)準(zhǔn)藥物水飛薊賓相當(dāng)。

4. 抗菌作用

從Geranium Sibiricum L. 的乙醇提取物中分離出有較強(qiáng)抗菌活性的鞣花酸等物質(zhì)，其中以柯里拉京活性最強(qiáng)，對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌濃度(瓊脂雙倍稀釋法)為25 μg·mL。從熊果提取物中分離出有效成分柯里拉京可顯著性增強(qiáng)β-內(nèi)酰胺類抗生素如苯唑西林、頭孢美唑的抗耐甲氧西林金葡菌作用，使其MICs 降低100~2 000倍，二者為協(xié)同作用。但對(duì)其他類抗生素?zé)o效。

6. 抗炎作用

利用RT-PCR 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)柯里拉京等單寧類化合物可誘導(dǎo)利曼原蟲感染的巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞RAW264.7 的NO 合酶和細(xì)胞因子樣基因表達(dá)。進(jìn)一步的作用機(jī)制研究表明Cor 可通過(guò)阻斷NF-κB 激活顯著性減少LPS 誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞TNF-α，IL-1β，IL-6，NO 以及COX-2 等炎性因子的表達(dá)。

7. 神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用

隨著社會(huì)進(jìn)步和人類壽命的延長(zhǎng)，神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默氏病(AD)等正隨著人口老齡化而逐漸增加。從天然產(chǎn)物中尋找抗老化，保護(hù)腦組織功能的有效成分己成為醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)和臨床證據(jù)表明，氧化應(yīng)激和腦內(nèi)炎癥都是神經(jīng)退化性疾病的重要致病因素。前述抗氧化、抗炎作用提示，Cor 可能具備一定神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用潛能。

制備^[1][2]

目前，還沒(méi)有對(duì)柯里拉京化學(xué)合成的研究，因此，柯里拉京均從植物中分離提取得到?？吕锢┑奶崛》椒ê芏啵Ｓ玫姆椒ㄓ腥軇┨崛》?、超聲輔助提取法。近年來(lái)，許多新技術(shù)受到青睞，并在柯里拉京提取中得到運(yùn)用，提高了有效成分的提取率。

1.有機(jī)溶劑提取法

柯里拉京的有機(jī)溶劑提取多以70%乙醇滲漉、70%乙醇回流、50%丙酮-水回流等提取方式。將藥材粉碎后，用10 倍量50%丙酮-水回流4 次，每次1 小時(shí)，結(jié)果柯里拉京提取率高，且克服了柯里拉京難溶于水、高溫易氧化的缺點(diǎn)。有機(jī)溶劑提取法簡(jiǎn)單、實(shí)用、經(jīng)濟(jì)、適用于大規(guī)模生產(chǎn)，但存在著提取周期長(zhǎng)、工序繁瑣等問(wèn)題。

2.超聲輔助提取法

將藥材制成細(xì)粉，精密加入50%丙酮-水溶液，超聲提取。并采用單因素分析法對(duì)超聲輔助提取柯里拉京的工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示，超聲的介入能顯著縮短提取時(shí)間，明顯加快溶出效率，HPLC 測(cè)得的峰形最優(yōu)，且提取完全，同時(shí)保證了穩(wěn)定性。超聲輔助提取法不僅可以避免高溫高壓破壞有效成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并且縮短了提取時(shí)間，提高了提取效率，但此方法不適于大規(guī)模生產(chǎn)。

3.亞臨界水萃取技術(shù)(SWE)

SWE 是近十多年剛剛發(fā)展起來(lái)的一種新型提取技術(shù)，國(guó)內(nèi)對(duì)該技術(shù)的研究才剛剛起步，應(yīng)用更是鮮見(jiàn)報(bào)道。用SWE 提取訶子果實(shí)中柯里拉京等多酚類物質(zhì)，并對(duì)SWE 與熱水提取、常壓下乙醇索氏提取進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SWE 的提取效率最高。并采用正交分析法對(duì)SWE 提取柯里拉京的工藝進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)在4 MPa，水體積流量為4 ml/min、溫度120 ℃時(shí)，柯里拉京提取率最高。SWE 具有省時(shí)、高效、環(huán)保等優(yōu)勢(shì)，在國(guó)外作為一種綠色環(huán)保技術(shù)已應(yīng)用于植物有效成分提取等許多領(lǐng)域。

4.高壓輔助提取法(HPE)

將高壓輔助提取(HPE)應(yīng)用于柯里拉京等多酚的提取，并比較了HPE 與超聲提取、傳統(tǒng)提取的效率，還對(duì)HPE 提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，確定了最佳提取條件。結(jié)果表明柯里拉京濃度、提取率、總酚含量HEP 都是最高的，適于大規(guī)模生產(chǎn)。新技術(shù)在植物藥提取分離方面具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，但新技術(shù)在提取上的應(yīng)用還不夠成熟，仍存著不同層次的局限性，還需要更加深入的研究。

主要參考資料

[1] 葉下珠屬植物活性成分柯里拉京研究進(jìn)展(綜述)

[2] 柯里拉京藥理活性研究進(jìn)展