25956-17-6 / 誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備和含量檢測(cè)

背景及概述^[1-2]

誘惑紅是食用色素的一種，呈鮮艷的深紅色，單色品種。該色素穩(wěn) 定性優(yōu)良，被廣泛用于食品、飲料、藥品、化妝品、飼料、煙草、玩具、 食品包裝材料等的著色。水溶性合成色素，鮮艷的深紅色，應(yīng)用于糖果 包衣、冰淇淋、雪糕、糖果、糕點(diǎn)、飲料等的著色。

誘惑紅為深紅色均勻粉末，無臭。溶于水，可溶于甘油和丙二醇，微溶于乙醇，不溶于油脂。溶于水呈微帶黃色的紅色溶液。耐光、耐熱性強(qiáng)，耐堿及耐氧化還原性差。性質(zhì)類似于其他重氮型紅色素。對(duì)含二氧化硫或氫離子(pH≥3)的水溶液耐受性佳。著色牢度強(qiáng)。溶于水，中性和酸性水溶液呈紅色，堿性呈暗紅色。

誘惑紅為水溶性合成色素，呈鮮艷的深紅色，廣泛應(yīng)用于糖果包衣、冰淇淋、雪糕、糖果、糕點(diǎn)、飲料等的著色。我國(guó)《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB 2760?1996)規(guī)定：用于糖果包衣時(shí)最大使用量為0.085g/kg，用于冰淇淋時(shí)最大使用量為0.07g/kg，用于炸雞調(diào)料時(shí)最大使用量為0.4g/kg。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備^[3]

稱取食品添加劑級(jí)誘惑紅樣品(來自上海染料研究所)2.15g，加入 40ml去離子水，配制成約0.05g/ml的誘惑紅水溶液。稱取100g Sephadex LH?20凝膠，加入300ml色譜級(jí)甲醇溶脹15min，待凝膠充分溶脹后進(jìn)行 裝柱(約2米長(zhǎng))，并用去離子水和色譜級(jí)甲醇交替清洗凝膠，重復(fù)3次。

將配制好的誘惑紅水溶液進(jìn)行上樣，以去離子水作為流動(dòng)相進(jìn)行凝膠 過濾色譜分離，控制色譜柱的溫度為20℃，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的流速為3ml/min， 每個(gè)流分接液50ml，將所接流分均進(jìn)行密封避光保存。

對(duì)所有流分進(jìn)行HPLC檢測(cè)，其中檢測(cè)條件為：色譜柱：GRACE Apollo C18(250mm×4.6mm 5μm)；流動(dòng)相：甲醇/0.08M乙酸銨水溶液 (30/70)；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm和540nm；柱溫：40℃； 進(jìn)樣量：5μl。發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，其中第6流分含有純度達(dá)到99％以上 的誘惑紅，經(jīng)真空冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，得到純度為99％以上的干 燥誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

對(duì)于含有較低純度誘惑紅的其它流分，還可以 通過再次進(jìn)行上述凝膠過濾色譜得到進(jìn)一步純化，從而獲得更多的純度為 99％以上的誘惑紅。

含量檢測(cè)^[4]

(1)聚磺基水楊酸-三聯(lián)吡啶釕修飾的玻碳電極的制備

將玻碳電極置于含1.0×10^-2mol/L磺基水楊酸與1.0×10^-4mol/L三聯(lián)吡啶釕的水溶液中，采用循環(huán)伏安法進(jìn)行電聚合，在-1.5～+2.0V的電位范圍內(nèi)，掃速0.1V/s，掃描10～30圈，取出晾干后得到修飾電極。

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將步驟(1)制備的修飾電極作為工作電極，飽和甘汞電極作為參比電極，鉑電極作為輔助電極，組成三電極體系，并以pH＝10的0.1mol/L PBS緩沖液為空白溶液檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度，將該三電極體系置于含有不同濃度誘惑紅(1.0×10^-7mol/L，5.0×10^-7mol/L，1.0×10^-6mol/L，5.0×10^-6mol/L，1.0×10^-5mol/L，5.0×10^-5mol/L和1.0×10⁴mol/L)pH＝10的PBS緩沖溶液中，在0.1V到1.5V的電位范圍內(nèi)進(jìn)行循環(huán)伏安法掃描，光電倍增管電壓為800V，在此條件下，記錄E-ECL曲線，并讀出發(fā)光強(qiáng)度峰值。所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)后，以誘惑紅的濃度為橫坐標(biāo)，空白溶液和誘惑紅的發(fā)光強(qiáng)度差值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而獲得相應(yīng)的線性回歸方程。上述方程的線性范圍為1.0×10^-7～1.0×10^-4mol/L，根據(jù)本發(fā)明所用玻碳電極的直徑為3mm，檢測(cè)限為0.6×10^-7mol/L。

(3)樣品的檢測(cè)

選取市售的西瓜飲料試樣1.0mL置于100mL容量瓶中，用pH＝10的0.1mol/L PBS緩沖溶液定容至100mL，取20mL所得溶液用于電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，按照與步驟(2)相同的電化學(xué)測(cè)試方法對(duì)待測(cè)樣品溶液進(jìn)行測(cè)試，以獲得ECL發(fā)光強(qiáng)度值及其與空白溶液發(fā)光強(qiáng)度值差值，所得發(fā)光強(qiáng)度值差值用步驟(2)所得標(biāo)準(zhǔn)曲線所對(duì)應(yīng)的線性回歸方程計(jì)算出待檢測(cè)樣品中誘惑紅的濃度。

參考文獻(xiàn)

[1] 誘惑紅產(chǎn)品介紹

[2] [中國(guó)發(fā)明] CN201110035545.2 用于檢測(cè)誘惑紅的方法及酶聯(lián)免疫試劑盒

[3] [中國(guó)發(fā)明,中國(guó)發(fā)明授權(quán)] CN201010541188.2 一種誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其制備和應(yīng)用

[4] [中國(guó)發(fā)明,中國(guó)發(fā)明授權(quán)] CN201611027826.2 一種固定三聯(lián)吡啶釕及電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)誘惑紅的方法