3671-99-6 / D-葡萄糖-6-磷酸二鈉在生化研究中的應(yīng)用

背景及概述^[1][2]

D-葡萄糖-6-磷酸二鈉是一種有機(jī)物質(zhì)，其主要用于生化研究，測定6-磷酸葡萄糖脫氫酶的底物。如果吸入D-葡萄糖-6-磷酸二鈉，請將患者移到新鮮空氣處；如果皮膚接觸，應(yīng)脫去污染的衣著，用肥皂水和清水徹底沖洗皮膚，如有不適感，就醫(yī)；如果眼晴接觸，應(yīng)分開眼瞼，用流動清水或生理鹽水沖洗，并立即就醫(yī)；如果食入，立即漱口，禁止催吐，應(yīng)立即就醫(yī)。對保護(hù)施救者的忠告如下：將患者轉(zhuǎn)移到安全的場所，咨詢醫(yī)生，如果條件允許請出示此化學(xué)品安全技術(shù)說明書給到現(xiàn)場的醫(yī)生看。若泄露，小量泄漏盡可能將泄漏液體收集在可密閉的容器中，用沙土、活性炭或其它惰性材料吸收，并轉(zhuǎn)移至安全場所，禁止沖入下水道；若大量泄漏，構(gòu)筑圍堤或挖坑收容，封閉排水管道，用泡沫覆蓋，抑制蒸發(fā)，用防爆泵轉(zhuǎn)移至槽車或?qū)Ｓ檬占鲀?nèi)，回收或運至廢物處理場所處置。

結(jié)構(gòu)

應(yīng)用^[1-2]

D-葡萄糖-6-磷酸二鈉主要用于生化研究。

測定6-磷酸葡萄糖脫氫酶的底物。其應(yīng)用舉例如下：

1.用于表小檗堿體外大鼠肝微粒體孵育代謝產(chǎn)物鑒定。表小檗堿是黃連中一種重要的異喹啉類生物堿。研究表明表小檗堿具有較強(qiáng)的抗氧化活性，能夠抑制醛糖還原酶，降血糖，對抗糖尿病潛在并發(fā)，其作用強(qiáng)于小檗堿。檢測過程中所使用的D-葡萄糖-6-磷酸二鈉 和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶均購于北京拜耳迪生物技術(shù)有限公司( Sigma 公司分裝)。D-葡萄糖-6-磷酸二鈉主要用于檢測過程中探針?biāo)幬锔挝⒘ｓw溫孵：將各探針?biāo)幬锱cRLM 于 37 ℃ 水浴中預(yù)溫孵 5 min，加入 NADPH 發(fā) 生系統(tǒng)( 終濃度含 1 mmol/L NADPNa2，20 mmol /LD-葡萄糖-6-磷酸二鈉（G-6-P），2 U /L G-6-PDH，20 mmol/L MgCl2 ) ，用 0.15 mol/L的 KCl 緩沖液( pH 7.4) 定容使整個溫孵體系終體積為 0.4 mL( 含有美托洛爾 20 μmol/L、氨苯砜25 μmol/L、非那西丁 25 μmol/L、氯唑沙宗 25 μmol/L、甲苯磺丁脲 25 μmol/L ) 和 1 g/L蛋白，于37 ℃水浴中均勻振蕩40 min。取出體外溫孵樣品放入冰浴中，按1∶ 3 加入冰冷的甲醇終止反應(yīng)，同時加入內(nèi)標(biāo)物 0.06 g/L五味子醇甲20 μL，振搖 30 s，于 4 ℃，1 萬× g 離心 20 min。吸取上清夜氮氣吹干，甲醇( 400 μL) 復(fù)容，4 ℃，1 萬× g，離心20 min，取上清進(jìn)樣20 μL，進(jìn)行 HPLC 分析，每個樣本均做3 個重復(fù)。

2. 用于測定吳茱萸次堿對 5 種黃連生物堿大鼠體外肝代謝的抑制作用。

黃連和吳茱萸配伍使用已有悠久歷史，二藥一寒一熱，相反相成。黃連主要成分為異喹啉型生物堿，包括黃連堿（COP）、表小檗堿（EPI）、小檗 堿（BER）、巴馬?。≒AL）、藥根堿（JAT）等，吳茱萸次堿（RUT）為吳茱萸的主要成分。近年來的 研究發(fā)現(xiàn)，黃連與吳茱萸成分間存在明顯的藥動學(xué)相互作用。黃連生物堿主要在肝臟代謝，吳茱萸成分中的 RUT 能選擇性抑制大鼠和人肝微粒體 酶的活性，吳茱萸成分對 BER 的大鼠肝代謝具 有抑制作用。由于不同黃連生物堿存在明顯腸吸收的選擇性，因此推測吳茱萸對黃連各生物堿肝代 謝應(yīng)存在抑制作用并具有選擇性。有實驗采用大鼠體外肝微粒體溫孵代謝模型，通過獲得半數(shù)抑制濃度（IC50）及抑制常數(shù)（Ki）值，判斷 RUT 對黃連中 5 種生物堿成分（COP、EPI、BER、PAL、JAT）是否具有體外代謝性抑制 作用及強(qiáng)弱程度，比較 RUT 對這 5 種生物堿抑制作 用的差異性。D-葡萄糖-6-磷酸二鈉（G-6-P）主要用于檢測過程中NADPH-發(fā)生系統(tǒng)的制備：精密稱取 NADPNa2、G-6-P、G-6-PDH、MgCl2 適量，加水定量溶解，即得含 2 mmol/L NADPNa2、 20 mmol/L G-6-P、4 U/L G-6-PDH、40 mmol/L MgCl2 的 NADPH-發(fā)生系統(tǒng)。

主要參考資料

[1] 楊曉燕, 葉靜, 孫桂霞, 等. 表小檗堿體外大鼠肝微粒體孵育代謝產(chǎn)物鑒定及對 CYP2D6 酶活性的抑制作用[J]. 中國中藥雜志, 2014, 39(19): 3855-3859.

[2] 薛寶娟, 李志慧, 張玉杰, 等. 吳茱萸次堿對 5 種黃連生物堿大鼠體外肝代謝的抑制作用[D]. , 2014.