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酚試劑是一種常用的測定蛋白質(zhì)試劑，與蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)包括二步：第一步是在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物;第二步是蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑，生成藍(lán)色物質(zhì)。在一定條件下，藍(lán)色強度與蛋白質(zhì)的量成正比。此法是生化工作領(lǐng)域內(nèi)較廣泛應(yīng)用的一種蛋白質(zhì)濃度測定的方法。優(yōu)點是操作簡便，靈敏度高，可測25～250μg蛋白質(zhì);缺點是該試劑只與蛋白質(zhì)中酪氨酸、色氨酸起反應(yīng)，因此有蛋白質(zhì)特異性影響，即不同蛋白質(zhì)因酪氨酸、色氨酸含量不同而使顯色強度稍有不同，標(biāo)準(zhǔn)曲線也不是嚴(yán)格直線。
現(xiàn)有的對空氣中甲醛含量的測定方法，多利用一些列酶與甲醛發(fā)生的酶促反應(yīng)，再將反應(yīng)物置于紫外/可見光分析儀下，檢測主波長處吸光度上升的程度，從而測算出甲醛的濃度大小。這些方法中所選酶系復(fù)雜，具有一定的檢測成本，且計算過程相對保密，限制了使用范圍。并且其精確度較低，屬于定性測量，限制測定的場所。針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，利用酚試劑比色法來測定空氣中甲醛含量，靈敏度高，選擇性好，操作簡便。
技術(shù)方案為：一種空氣中甲醛含量測定方法，利用不同濃度的甲醛與酚試劑反應(yīng)生成嗪，采用酚試劑比色法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后在硫酸鐵銨的高鐵離子存在下，嗪在酸性溶液中被高鐵離子氧化形成藍(lán)綠色化合物，根據(jù)顏色深淺，比色測定得出空氣中甲醛含量，具體包括以下步驟：
(1)采樣：采樣前，被采樣房間必須密閉24小時，采樣需在風(fēng)平浪靜氣候環(huán)境下進(jìn)行，用一個內(nèi)裝5毫升吸收液的大型氣泡吸收管，以0.5升/分流量，采氣10升；
(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取8支10毫升的比色管，按照下表配制標(biāo)準(zhǔn)色列：
在各管中加入0.40毫升1％硫酸鐵銨溶液，搖勻，放置15分鐘后，用1厘米的比色皿，于波長630納米處，以水為參比，測定吸光度，以吸光度對甲醛含量(微克)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線，或用最小二乘法計算標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式：
Y＝bX+a——(a)
(a)式中：
Y—(A-A0)，即標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度(A)與試劑空白液吸光度(A0)之差；
X—甲醛含量，微克；
b—回歸方程式的斜率；
a—回歸方程式的截距，
(3)樣品測定：采樣后，將樣品溶液移入比色管中，用少量吸收液洗滌吸收管，洗液 并入比色管使總體積為5毫升；
(4)、數(shù)據(jù)處理，按照下式計算甲醛溶液的濃度C，單位：毫克/毫升，
(b)式中：
A—樣品溶液吸光度；
A0—試劑空白液吸光度；
b—回歸方程式的斜率；
a—回歸方程式的截距；
Vr—換算為參比狀態(tài)下的采樣體積，單位為升。
目前，檢測蛋白質(zhì)常用的方法有凱氏定氮法、自動定氮儀法、雙縮脈法，通過同時 對飼料中的粗蛋白質(zhì)進(jìn)行測定，并對結(jié)果進(jìn)行了分析比較，結(jié)果表明：凱氏定氮法測定所用的時間較長，測得結(jié)果比較穩(wěn)定；自動定氮儀同國標(biāo)法相比，結(jié)果偏高，相對偏差較小，但實 驗成本高；雙縮脈法測定結(jié)果偏低，偏差較大，但操作簡單，效率高，更適合飼料廠等企業(yè)的快速測定。因此，這些缺點使得以上方法均無法滿足企業(yè)實際生產(chǎn)的需要。酚試劑可用于提供一種牧草飼料中蛋白質(zhì)的檢測方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。
檢測步驟如下：
（1）稱取牧草飼料粉碎，放入燒瓶中，加入氫氧化鈉溶液，放入60℃的水浴中5h進(jìn)行反 應(yīng)，取出搖勻，加入蒸餾水稀釋40倍，離心5min，靜置；
（2）取上清液放入試管中，加入酚試劑甲液，混合均勻，于38℃恒溫水浴中放置20min；再加入酚試劑乙液，立即振蕩混合均勻，在38℃恒溫水浴中保溫30min，用1cm光徑比色皿在750nm波長下測定吸光度，并根據(jù)測定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比得到樣品蛋白質(zhì)含量。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立如下：
（1）試劑配制
標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液0.10mg/mL；
酚試劑甲液：將3％碳酸鈉溶液、0.2mol/L氫氧化鈉溶液、0.01％五水硫酸銅溶液、0.02％檸檬酸鉀溶液等體積混合，該溶液當(dāng)天配制當(dāng)天使用；
酚試劑乙液：配制濃度為2.5％的鉬酸鈉溶液，與體積分?jǐn)?shù)為85％的濃磷酸進(jìn)行反應(yīng)，加入硫酸鋰和溴化氫，稀釋5倍，過濾后，保存在棕色瓶中；使用時前進(jìn)行標(biāo)定；
（2）曲線制作
取8支試管，加入不同量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白和蒸餾水混勻后，每管加入4mL酚試劑甲液，混勻，于38℃下放置20min；再加入0.4mL酚試劑乙液，立即振蕩混勻，在38℃下保溫30min，用1cm光徑比色皿在750nm下測定吸光度；以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[1]常用中藥詞語詞典
[2]CN201710579528.2
[3] CN201610949713.1