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系統(tǒng)名“1-甲基-4-酮-2-亞胺基咪唑啉”。分子式C4H7N3O。分子量113.12。由水中得葉片狀晶體或二水合正交棱晶體。溶于熱水，微溶于乙醇，不溶于丙酮、乙醚、氯仿等。為尿、肌肉等的組成部分，在機(jī)體內(nèi)主要以磷酸肌酸的形式存在，游離肌酸酐很少。加熱至250℃變焦黃，295℃完全分解。紫外線(xiàn)下能發(fā)光。與次溴酸鈉溶液反應(yīng)24小時(shí)放出1mol氮。與濃磷酸于150℃加熱放出1mol氮，230℃時(shí)放出所有氮。
與過(guò)量苯甲醛或1mol亞芐基苯胺于150℃加熱得5-亞芐基肌酸酐，與3-硝基苯甲醛和香蘭素均有類(lèi)似反應(yīng)。與氫氧化鋇水溶液和硝酸銀共熱氧化為甲基胍，與堿性高錳酸鉀或氧化汞反應(yīng)得甲基胍和草酸。與0.7%蘇打溶液反應(yīng)消除氨得到1-甲基乙內(nèi)酰脲，并能被苦味酸和苦味酸鉀定量分解。制法：由肌酸與90%乙酸或氯化鋅共沸，或由肌氨酸乙酯與胍在-15℃或與氰基氨于室溫下反應(yīng)而制得。用途：作生化研究試劑。
肌酸酐是磷酸肌酸代謝的產(chǎn)物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是肌酸通過(guò)脫水縮合形成的內(nèi)酰胺。肌酸酐一般存在于血液中，通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)腎臟并被過(guò)濾掉。對(duì)于腎功能正常的人群來(lái)說(shuō)，血液 中的肌酸酐濃度因人因地而異。一般而言，在無(wú)大體力負(fù)擔(dān)的情況下，女性的血液中的肌酸 酐濃度在45-60μM；男性的血液肌酸酐濃度在60-110μM的范圍內(nèi)浮動(dòng)。
肌酸酐的測(cè)量比較困難。目前常用的方法是質(zhì)譜法（同位素稀釋質(zhì)譜法）、高效液相色譜 法、液相色譜-質(zhì)譜連用法以及抗體檢測(cè)（ELISA），這些方法一般都需要昂貴的儀器，如質(zhì)譜儀、液相色譜儀或酶標(biāo)儀等，以及受過(guò)系統(tǒng)訓(xùn)練的分析化學(xué)操作人員的操作，極大地提高肌 酸酐測(cè)量的經(jīng)濟(jì)成本和時(shí)間成本，以及肌酸酐測(cè)量在邊遠(yuǎn)地區(qū)的應(yīng)用。
質(zhì)譜法通過(guò)在樣品中人為加入含有某種同位素（如O-18）的肌酸酐并對(duì)此樣品進(jìn)行質(zhì)譜 分析。比對(duì)質(zhì)譜結(jié)果中O-18的豐度和O-18在自然界中的豐度即可計(jì)算出肌酸酐的濃度。人 為加入的肌酸酐可以嚴(yán)格控制，作為一種內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)（internalcalibration），這種方法可以有 效的降低誤差。
根據(jù)最新研究，用質(zhì)譜法得到的肌酸酐濃度偏低，這將在臨床上引起一系列問(wèn)題，美國(guó)FDA也開(kāi)始考慮新的肌酸酐檢測(cè)手段。液相色譜法是在質(zhì)譜的基礎(chǔ)上使用高效液相色譜對(duì)樣品進(jìn)行純化并用質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)。質(zhì) 譜法和液相色譜法無(wú)法自動(dòng)化、操作復(fù)雜，并且需要分析團(tuán)隊(duì)對(duì)儀器進(jìn)行操作和維護(hù)，而ELISA 法需要使用價(jià)格昂貴的酶標(biāo)儀，雖然其靈敏度極高，但是選擇性較差，經(jīng)常會(huì)高估肌酸酐的濃度，導(dǎo)致臨床用藥的過(guò)量或不足。
CN201310363461.0提供一種選擇性高、靈敏度高和使用方便 的肌酸酐含量檢測(cè)試劑和試劑盒，及試劑盒的制作和使用方法。通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
一種肌酸酐含量檢測(cè)試劑，包括肌酸酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶和辣根過(guò)氧化物酶， 熒光染料5（6）-羧基-2,7-二氯二氫熒光素二特戊酸酯，肌酸酐在肌酸酐酶的催化下被水解成為肌酸，肌酸在肌酸酶的催化下被水解成肌氨酸，肌氨酸隨之在肌氨酸氧化酶的催化下生成甘氨酸以及少量的過(guò)氧化氫。
在辣根氧化物酶的催化下，過(guò)氧化氫催化氧化了5（6）-羧基-2,7-二氯二氫熒光素二特戊酸酯并生成具有熒光響應(yīng)的產(chǎn)物，通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光增強(qiáng)的速率以及標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，獲得肌酸酐濃度，其中所述肌酸酐酶：肌酸酶：肌氨酸氧化酶：辣根過(guò)氧化物酶：熒光染料的重量比為：1：50：60：5。而且，包括如下三層結(jié)構(gòu)：
⑴染料底層：將熒光染料修飾過(guò)的纖維素和D4水凝膠混合并攪拌，在一張干凈的塑料 薄膜上用刮刀涂膜機(jī)涂上一層D4水凝膠的薄膜并使之自然風(fēng)干；
⑵蛋白酶固定層：在PVA-Sbq（聚丙烯醇-苯基吡啶乙烯絡(luò)合物）的水溶液中加入10%的牛血清蛋白以及反應(yīng)所需的肌酸酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶和辣根過(guò)氧化物酶，攪拌25-40 分鐘以上，用刮刀涂膜機(jī)涂上一層酶的PVA-Sbq溶液，將紫外燈置于膜層的上方30分鐘，使苯基吡啶乙烯交聯(lián)并使膜層變干；
⑶頂層保護(hù)層：最后在上面用刮刀涂膜機(jī)涂上一層含有10%炭黑的D6水凝膠，并使膜 層自然風(fēng)干。
而且，三層結(jié)構(gòu)的具體制備步驟如下：
⑴將176mg纖維素固定的5（6）-羧基-2,7-二氯二氫熒光素二特戊酸酯和2.6g的4%D4 水凝膠溶液混合并攪拌均勻，使纖維素粉末在溶液中均勻分散；
⑵將步驟⑴中所制備的溶液均勻在塑料薄膜上使之形成一層厚度為100uM的薄膜并晾 干；
⑶將30mg肌酸酶、35mg辣根過(guò)氧化物酶、0.63mg肌酸酐酶、2.6mg肌氨酸氧化酶、340mg水和1.33g濃度為10%并含有10%牛血清蛋白的PVA-Sbq溶液混合，并在冰上攪拌 均勻；
⑷在步驟⑵中制備的薄膜上涂上步驟⑶中所制備的PVA-Sbq/酶溶液，膜層的厚度為100 μm，將薄膜置于紫外燈下30分鐘；
⑸在步驟⑷中所制備的薄膜上涂上一層含有6%炭黑和1.8%D6的溶液并自然風(fēng)干。
肌酸酐含量檢測(cè)試劑盒，包括上述的檢測(cè)試劑。制備方法步驟如下：
⑴將176mg纖維素固定的5（6）-羧基-2,7-二氯二氫熒光素二特戊酸酯和2.6g的4%D4 水凝膠溶液混合并攪拌均勻，使纖維素粉末在溶液中均勻分散；
⑵將步驟⑴中所制備的溶液均勻在塑料薄膜上使之形成一層厚度為100uM的薄膜并晾干；
⑶將30mg肌酸酶、35mg辣根過(guò)氧化物酶、0.63mg肌酸酐酶、2.6mg肌氨酸氧化酶、 340mg水和1.33g濃度為10%并含有10%牛血清蛋白的PVA-Sbq溶液混合，并在冰上攪拌 均勻；
⑷在步驟⑵中制備的薄膜上涂上步驟⑶中所制備的PVA-Sbq/酶溶液，膜層的厚度為100 μm，將薄膜置于紫外燈下30分鐘；
⑸在步驟⑷中所制備的薄膜上涂上一層含有6%炭黑和1.8%D6的溶液并自然風(fēng)干。
試劑盒的使用方法，其特征在于：在含有100mMHEPES，150mM氯化鈉，5mM 氯化鉀，1.3mM氯化鈣的緩沖液中，pH7.3，加入不同濃度肌酸酐，用毛細(xì)管兩驅(qū)150μL 的樣品溶液并安插在試劑盒上并用熒光儀開(kāi)始測(cè)量。
圖2為本發(fā)明肌酸酐傳感器使用的試劑盒的結(jié)構(gòu)；
[1]化合物詞典
[2]CN201310363461.0 一種三層結(jié)構(gòu)的肌酸酐含量檢測(cè)試劑的制備方法