60514-48-9 / 1,2-十八?；?SN-甘油的制備和應(yīng)用

背景及概述^[1]

1,2-十八酰基-SN-甘油是一種有機(jī)中間體，可由(R)-(+)-3-芐氧基-1,2-丙二醇和辛酰氯為原料，先?；诤厦撊テS氧羰基得到1,2-十八?；?SN-甘油。1,2-十八?；?SN-甘油可用于制備葉酸靶向分子聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八?；?SN?甘油脂質(zhì)材料。

制備^[1]

十分鐘內(nèi)，向(R)-(+)-3-芐氧基-1,2-丙二醇(4.0g,21.95mmol)在無(wú)水吡啶(40mL)中的溶液中逐滴加入辛酰氯(8.93g,54.87mmol)，然后加入DMAP（267毫克，2.19毫摩爾）。將反應(yīng)混合物在55°C攪拌48小時(shí)，用EtOAc(300mL)稀釋，依次用水(100mL)、1NHCl(2x100mL)和鹽水(100mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮。殘余物在SiO2柱(3%EtOAc/己烷)上純化，得到7.3g(75%)無(wú)色漿狀產(chǎn)物。產(chǎn)量7.3g(75%)。TLC(SiO2)hexane/EtOAc(9:1)Rf~0.52.1HNMRδ(CDCl3,500MHz)0.87(t,J=7.0Hz,6H),1.22-1.34(m,16H),1.52-1.66(m,4H),2.22-2.34(m,4H),3.58(d,J=4.2Hz,2H),4.18(dd,J=6.Aand11.9Hz,1H),4.34(dd,J=6.4and11.9Hz,1H),4.51(d,J=12.2Hz,1H),4.57(d,J=12.2Hz,1H),5.21-5.28(m,1H),7.28-7.36(m,5H).

將上述油狀物(6.8g,15.66mmol)溶于EtOH:EtOAc:AcOH(9:1:0.1)(30mL)中的溶液，在40psi下在10%Pd/C(900mg,10%)中氫化3小時(shí)。在硅藻土床上濾出催化劑并濃縮得到1,2-十八?；?SN-甘油，產(chǎn)率(5.0,93%)。TLC(SiO2)hexane/EtOAc(3:2)Rf~0.31.1HNMRδ(CDCl3,300MHz)0.87(t,J=7.0Hz,6H),1.22-1.34(m,16H),1.52-1.66(m,4H),2.03(t,J=6.2Hz,1H,D2Oexchangeable),2.32(t,J=7.6Hz,2H),2.35(t,J=7.6Hz,2H)3.73(t,J=6.0Hz,2H)),4.22(dd,J=5.8and11.9Hz,1H),4.33(dd,J=5.8and11.9Hz,1H),5.08(quintet,J=5.1Hz,1H).

應(yīng)用^[2]

報(bào)道一、

近年來(lái)，在生物材料和高分子化學(xué)高速發(fā)展的推動(dòng)下，各種功能的高分子材料不斷涌現(xiàn)，促使藥物制劑和劑型的研究飛速發(fā)展，并進(jìn)入給藥系統(tǒng)(Drugdeliverysystem，DDS)時(shí)代，使研制長(zhǎng)效、高效、靶向性等新型給藥系統(tǒng)成為藥劑學(xué)研究發(fā)展的方向。聚乙二醇(PEG)具有良好的水溶性、生物相容性、無(wú)抗原、毒性小等特點(diǎn)。常用來(lái)修飾磷脂酰膽堿及脂肪酸作為制備乳劑或脂質(zhì)體的輔料，該輔料對(duì)脂質(zhì)載體表面進(jìn)行修飾后，可增加脂質(zhì)載體的親水性和空間位阻，還可以避免其被體內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，并且能提高脂質(zhì)載體的穩(wěn)定性，使脂質(zhì)載體具有更長(zhǎng)的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，更高的血藥濃度聚集，使得在病變部位更好的發(fā)揮療效，且能減輕毒副作用。在PEG的另一端接上靶向分子，被修飾的脂質(zhì)材料，也具有良好的生物相容性、無(wú)抗原、毒性小等特點(diǎn)，將它作為藥物載體，其優(yōu)點(diǎn)包括：用于臨床能賦予藥用載體靶向性，可提高靶向組織的藥物濃度，增加藥物的治療指數(shù)以及擴(kuò)大臨床應(yīng)用等。

1,2-十八酰基-SN-甘油可用于制備葉酸靶向分子聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八?；?SN?甘油脂質(zhì)材料，步驟如下：

(1)將1mmol鉀在50ml石油醚下剪碎轉(zhuǎn)移至兩口瓶中，除去石油醚，室溫及氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將1mmol萘加入50ml無(wú)水的四氫呋喃(THF)中溶解，磁力攪拌反應(yīng)48h，生產(chǎn)鉀萘溶液；

(2)用40ml無(wú)水的THF溶液，將1mmol引發(fā)劑1，2?十八?；?SN?甘油溶解，與鉀萘溶液混合，室溫及磁力攪拌下12h，冰水浴條件下，加入?20℃保存的環(huán)氧乙烷單體45.0mmol，磁力攪拌反應(yīng)48h，用10.0mmol無(wú)水乙醇終止反應(yīng)，過(guò)濾溶液，得到聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八酰基?SN?甘油脂質(zhì)溶液；

(3)將聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八?；?SN?甘油脂質(zhì)溶液用枸櫞酸調(diào)節(jié)pH值為4，將其溶液與乙醚的比例1∶50沉淀三次，過(guò)200～300目的硅膠柱，透析兩天，用乙醇重結(jié)晶，得到末端為羥基的聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八?；?SN?甘油脂質(zhì)材料；

(4)將末端為羥基的聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八?；?SN?甘油偶聯(lián)葉酸靶向分子，即將聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八?；?SN?甘油脂質(zhì)末端的羥基氨基化后，再偶聯(lián)上葉酸靶向分子，其操作步驟如下：

(i)將0.5mmol的末端為羥基的聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八酰基?SN?甘油脂質(zhì)材料溶解于無(wú)水的二氯甲烷中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)及冰水浴下，磁力攪拌下，緩慢滴加5.0mmol的三乙胺和5.0mmol的甲基磺酰氯，攪拌12h，過(guò)濾反應(yīng)產(chǎn)物，產(chǎn)物在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶，甲基磺?；垡叶?2000Da)化1，2?十八酰基?SN?甘油脂質(zhì)材料；

(ii)另將0.2mmol的甲基磺?；垡叶?2000Da)化1，2?十八?；?SN?甘油脂質(zhì)材料加入100ml25％的氨水中溶解，在室溫下高速攪拌下反應(yīng)4天，溶液進(jìn)行萃取，粗產(chǎn)品在乙醇中進(jìn)行重結(jié)晶兩次，在真空下干燥，得到氨基化的聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八?；?SN?甘油脂質(zhì)材料；

(iii)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將0.4mmol的葉酸靶向分子溶解于無(wú)水的DMSO中，在室溫及磁力攪拌下，緩慢滴加入1.0mmol的EDC·HCL和1.0mmol的NHS攪拌2h，得到羧基活化的葉酸靶向分子溶液；

(iv)在室溫下，將0.1mmol的氨基化聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八?；?SN?甘油脂質(zhì)材料溶解于無(wú)水DMSO中，緩慢的滴加到羧基活化的葉酸靶向分子溶液中，反應(yīng)48h，過(guò)濾反應(yīng)產(chǎn)物，用水透析，進(jìn)行重結(jié)晶，得到含有葉酸靶向分子的聚乙二醇(2000Da)化1，2?十八?；?SN?甘油脂質(zhì)材料。

本方法是采用陰離子聚合法，由引發(fā)劑直接誘發(fā)環(huán)氧乙烷單體聚合，并通過(guò)酸化和純化得到生物相容性良好的聚乙二醇化脂質(zhì)材料，或進(jìn)一步通過(guò)化學(xué)方法將聚乙二醇化脂質(zhì)材料偶聯(lián)上靶向分子，將具有靶向分子的聚乙二醇化脂質(zhì)材料作為藥用材料時(shí)，能賦予藥用載體的靶向性，用于臨床可提高靶向組織的藥物濃度。

報(bào)道二、

CN201510675515.6提供一種基于聚羧基甜菜堿分子的基因轉(zhuǎn)染試劑，所述 基因轉(zhuǎn)染試劑包含聚羧基甜菜堿聚合物、復(fù)合緩沖液和基因轉(zhuǎn)染工作液。

聚羧基甜菜堿聚合物的每個(gè)單體單元側(cè)鏈都有一個(gè)陰離子基團(tuán)(羧酸根基 團(tuán))和一個(gè)陽(yáng)離子基團(tuán)(季胺基團(tuán))并且總體表現(xiàn)中性。在酸性條件下，聚羧 基甜菜堿分子的陰離子基團(tuán)(羧酸根基團(tuán))可以質(zhì)子化，使聚羧基甜菜堿帶有 正電荷，可以利用靜電相互作用與負(fù)電荷的核酸作用，高效負(fù)載核酸分子形成 復(fù)合物。當(dāng)復(fù)合物恢復(fù)生理?xiàng)l件下，聚羧基甜菜堿分子去質(zhì)子化使復(fù)合物表面 接近中性，同時(shí)可利用陽(yáng)離子和陰離子基團(tuán)與水分子的靜電相互作用吸附大量 水分子，在復(fù)合物表面形成水合層，有效抵抗非特異性蛋白質(zhì)，具有顯著的血 液穩(wěn)定性，從而顯著提高核酸的基因轉(zhuǎn)染效率。

優(yōu)選地，所述聚羧基甜菜堿聚合物為R-PCBn，所述R為二硬脂酰磷脂酰乙 醇胺(DSPE)、1,2-油?；字Ｒ掖及?DOPE)、1,2-十八酰基-sn-甘油(DG)。

參考文獻(xiàn)

[1]PCT Int. Appl., 2004039817,13 May 2004

[2][中國(guó)發(fā)明,中國(guó)發(fā)明授權(quán)]CN201110047613.7靶向性聚乙二醇化脂質(zhì)藥用材料的合成方法

[3] [中國(guó)發(fā)明] CN201510675515.6 一種聚羧基甜菜堿基因轉(zhuǎn)染制劑及其制備方法和用途