6199-67-3雪膽甲素的應(yīng)用

背景及概述^[1-2]

雪膽，別名金龜蓮、金盆，為葫蘆科植物雪膽(Hemsleyaamabilis Diels)及其同屬數(shù)種植物的干燥塊根，秋末葉黃時(shí)采挖，除去泥沙，切片，干燥。本品性苦、寒，入胃、大腸二經(jīng)，具有清熱解毒，抗菌消炎的功效。

雪膽屬植物全世界有31種，除2種產(chǎn)于印度、越南外，主要分布于我國云、貴、川三省，有眉雪膽(H emiensis)、彭縣雪膽(Hpengxianensis)、圓果雪膽(Hamabilis)、長果雪膽(Hdolichocarpa)、小花雪膽[Hgraciliflora]、巨花雪膽(H gigantha)等，該屬中多種植物為常用中藥。雪膽屬植物大多富含雪膽甲素(含量高達(dá)6.018 mg·g )、雪膽乙素、雪膽皂苷等。其中雪膽甲素為23，24-雙氫葫蘆素F-25-乙酸酯(23，24-dihydroxycucurbitacin F-25-acetate)。

結(jié)構(gòu)

應(yīng)用^[3]

1.抑菌作用

雪膽素抗菌作用顯著，濃度為0.1 mg·mL 時(shí)，對(duì)福氏痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌等有不同程度的抑制作用；較相同濃度的氯霉素強(qiáng)。建立雪膽中雪膽甲素反相高效液相色譜含量測定法，并對(duì)其抗菌機(jī)制進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)雪膽中雪膽甲素的含量為(5.3±0.4)mg·g，雪膽甲素通過抑制葡萄球菌細(xì)胞壁的合成發(fā)揮主要抑菌作用。

2. 抗腫瘤作用

研究雪膽甲素體內(nèi)外對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用，雪膽甲素誘導(dǎo)絲狀肌動(dòng)蛋白的不可逆聚集，增加G/M期細(xì)胞數(shù)量，抑制細(xì)胞循環(huán)。雪膽甲素導(dǎo)致磷酸化組蛋白H 的減少，同時(shí)顯著增強(qiáng)ADP核糖聚合酶的分裂。研究發(fā)現(xiàn)雪膽甲素能夠破壞肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架，通過抑制JAK2/STAT3下游生存素的生成誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

高申等以不同濃度的雪膽甲素作用于A549細(xì)胞和小鼠原代培養(yǎng)的脾細(xì)胞，采用MTI"法檢測雪膽甲素對(duì)兩種細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)及Annexin V-PE細(xì)胞凋亡試劑盒檢測雪膽甲素A549細(xì)胞細(xì)胞周期及凋亡的影響。研究表明雪膽甲素對(duì)A549細(xì)胞和小鼠原代脾細(xì)胞的增殖均有抑制作用，且呈濃度依賴性；雪膽甲素可將大部分A549細(xì)胞阻滯于Go/G 和S期，少部分細(xì)胞阻于G 和M期，并可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

3. 體外抗HIV活性Tian等叫應(yīng)用合胞體抑制實(shí)驗(yàn)、

p24抗原產(chǎn)生的抑制實(shí)驗(yàn)、慢性感染細(xì)胞和正常細(xì)胞間的細(xì)胞融合抑制實(shí)驗(yàn)等檢測雪膽甲素、雪膽乙素的體外抗HIV-1活性；利用HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶、蛋白酶抑制實(shí)驗(yàn)，NC07鋅離子逐出實(shí)驗(yàn)探討其作用機(jī)制。

結(jié)果顯示雪膽甲素、雪膽乙素抑制HIV-1誘導(dǎo)合胞體形成的半最大效應(yīng)濃度分別為3.09 g·mL～、2.53 g·mL；抑制HIV-1急性感染的C8166細(xì)胞p24抗原產(chǎn)生的半最大效應(yīng)濃度分別為3.97 g·mL、18.90 g·mL；抑制慢性感染H9與正常C8166細(xì)胞融合的EC50分別為1.76 I.Lg·mL、11.95 g·mL。此外，雪膽甲素、雪膽乙素對(duì)HIV-1反轉(zhuǎn)錄酶、蛋白酶，NC07 鋅離子逐出均無抑制作用；在共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，雪膽甲素、雪膽乙素預(yù)處理的C8166細(xì)胞組比未經(jīng)預(yù)處理細(xì)胞組更有效的抑制HIV-1活性。

4. 對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的保護(hù)作用

采用大鼠應(yīng)激性胃潰瘍、幽門結(jié)扎性胃潰瘍、醋酸致胃潰瘍等模型觀察雪膽提取物抗胃潰瘍作用、對(duì)正常大鼠胃液分泌的影響。研究發(fā)現(xiàn)雪膽提取物能使大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的潰瘍面積縮小，潰瘍指數(shù)降低；能減少大鼠胃液分泌，降低胃酸度及胃蛋白酶活性。

制備^[1-2]

方法1；一種高效性和選擇性、產(chǎn)率高、純度高、低污染的制備方法。按照下列步驟進(jìn)行：將干燥的雪膽藥材粉碎，過20~60目篩；取一定量的藥材粉末加入料液比為1：3~6倍、60%~95%的乙醇溶劑，并同時(shí)加入粉末重量0.1%~0.5%的生物酶在pH值4~5，溫度為45~50℃的條件下酶解1~3h；酶解完成后，將酶解物在溫度為50~60℃的條件下微波提取300~900s，過濾，濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液備用。

將濃縮液首先在溫度為20~40℃的條件下，用0.4微米的陶瓷膜分離出粗提液里面的蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)等物質(zhì)，再將所得到的提取液上聚酰胺層析柱先用2~4倍柱體積的水洗脫，再用3~5倍柱體積、60~80%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；乙醇洗脫液減壓濃縮至原體積的1/5~1/2，靜置，讓其在冰水浴中冷卻結(jié)晶，得粗結(jié)晶樣品；將粗結(jié)晶樣品溶解于熱水中，煮沸，冷卻，加入質(zhì)量體積比為1：50~70的雪膽甲素晶種，攪拌的條件下，在冰水浴中重結(jié)晶1~3次，過濾，收集結(jié)晶物即得雪膽甲素。

方法2：參照國家醫(yī)藥管理局的提取方法并加以改進(jìn)：取雪膽塊根，粉碎(過60目篩)，加95％乙醇，加熱回流浸煮，反復(fù)6～7次，每次2h。合并溶液，過濾，減壓蒸發(fā)，回收乙醇，得糖漿狀乙醇濃縮物，先加適量熱水稀釋，石油醚脫脂，無水硫酸鈉破乳，再加適量乙酸乙酯提取，反復(fù)6～7次，合并乙酸乙酯溶液，用水洗滌兩次后，棄去水層，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙酸乙酯，得糖漿狀乙酸乙酯濃縮物，在常溫下靜置過夜，使結(jié)晶析出，過濾，得雪膽甲素粗品。

母液經(jīng)濃縮、處理如前可再得粗品。雪膽甲素粗品，加適量丙酮，加熱回流溶解后，再加熱蒸發(fā)回收丙酮，濃縮至適當(dāng)濃度時(shí)，趁熱過濾，在常溫下靜置使析出結(jié)晶，預(yù)冷丙酮洗滌，過濾，揮干丙酮，即得雪膽甲素精品。

主要參考資料

[1] CN201510265074.2一種從雪膽中提取雪膽甲素的方法

[2] 雪膽甲素的提取與確證

[3] 雪膽素的研究進(jìn)展