9045-22-1 / 肝素鋰制備方法

背景技術(shù)

肝素，在臨床血液檢驗(yàn)中以鈉鹽和鋰鹽為常見(jiàn)，具有獨(dú)特的應(yīng)用價(jià)值，肝素螯合力低，對(duì)水分子運(yùn)動(dòng)的影響小，對(duì)血液成分干擾少，不影響紅細(xì)胞體積，不引起溶血，所以在多種以全血或血漿為標(biāo)本的檢驗(yàn)中，推薦使用肝素作為抗凝劑。適用于紅細(xì)胞脆性試驗(yàn)、血?dú)夥治?、紅細(xì)胞壓積實(shí)驗(yàn)、血流變及急診生化測(cè)定。在對(duì)Ph值、血?dú)?、電解質(zhì)和鈣離子的檢測(cè)中，肝素是唯一可以使用的抗凝劑，而肝素鋰在檢測(cè)非鋰離子時(shí)產(chǎn)生干擾的可能性最小，所以推薦使用肝素鋰作為抗凝劑，目前在血液檢驗(yàn)中，肝素鋰正在逐步取代肝素鈉。

肝素鋰的制備，目前國(guó)內(nèi)專(zhuān)利200510019846. 0公開(kāi)了離子平衡交換法制備肝素鋰，該法部分工藝環(huán)節(jié)需要低溫條件（10℃以下）操作，對(duì)物料及環(huán)境溫度控制要求較高， 硬件設(shè)施投入較大；該法在去蛋白工藝環(huán)節(jié)采用強(qiáng)酸性條件操作（PH1.5)，對(duì)肝素活性損失較大（肝素溶液在低PH值環(huán)境下很不穩(wěn)定，極易降解失活），影響最終活性收率和效價(jià)， 可操作性不強(qiáng)；該法采用超濾濃縮分離技術(shù)，超濾設(shè)備昂貴，硬件投入較大；該法采用的離子平衡交換方式，是以高濃度鋰離子不斷介入的方式來(lái)實(shí)現(xiàn)肝素鈉向肝素鋰的轉(zhuǎn)換，無(wú)法保證動(dòng)態(tài)離子平衡轉(zhuǎn)換的充分性和連續(xù)穩(wěn)定性。國(guó)外制備肝素鋰均采用離子交換法，該法需要選用精品肝素鈉為原料，原料成本高，而且在離子交換過(guò)程中可引起PH急劇下降，嚴(yán)重影響產(chǎn)品的收率和效價(jià)，并且交換過(guò)程需要在低溫提條件下進(jìn)行，導(dǎo)致肝素鋰生產(chǎn)硬件設(shè)施投入較大，生產(chǎn)成本較高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種肝素鋰制備方法，以解決上述問(wèn)題。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：肝素鋰制備方法，它是以下列步驟制備：

1、粗品肝素酶解：將粗品肝素鈉溶解，調(diào)PH值為7. 5-9. 0，升溫至50-55°C，加入肝素酶解胰酶，保溫4-5小時(shí)，調(diào)PH值9. 0-11，升溫至85°C?90°C后，冷卻，過(guò)濾去除沉淀物， 濾液用乙醇沉淀，收集沉淀物（A)；

2、去蛋白：步驟1所得沉淀物（A)用水溶解，攪拌，調(diào)PH至9-11，加入蛋白質(zhì)絮凝沉淀劑，攪拌，靜置，過(guò)濾去除沉淀，收集濾液（D)，濾液（D)調(diào)PH至11-13值，攪拌，靜置，過(guò)濾去除沉淀，收集濾液（E)，濾液（E)調(diào)PH值至中性，用乙醇沉淀，收集沉淀物（B)；

3、氧化脫色：將步驟2所得沉淀物（B)用水溶解，用過(guò)氧化氫氧化24-48小時(shí)，調(diào)整PH至10. 5-11. 5后，過(guò)濾去除沉淀物，收集濾液（F)，濾液（F)調(diào)PH值至6. 5-7. 5，用乙醇沉淀，收集沉淀物（C)；

4、樹(shù)脂交換：將步驟3所得沉淀物（C)用水溶解，加入LiCl，攪拌溶解，通過(guò)樹(shù)脂柱進(jìn)行離子交換，收集過(guò)柱流出液，得肝素鋰溶液；

5、沉淀、脫水、干燥：將步驟4所得肝素鋰溶液，過(guò)濾，用乙醇沉淀，收集沉淀物(G)，沉淀物（G)脫水，然后真空干燥，粉碎，得肝素鋰精品。

步驟1中，所述肝素酶解胰酶選用胰蛋白酶、含胰蛋白酶的復(fù)合胰酶、中性胰蛋白酶、堿性蛋白酶中的一種或含兩種以上的組合。

步驟2中，所述蛋白質(zhì)絮凝沉淀劑選用聚丙烯酸鈉、聚合氯化鋁、聚丙烯酸鈣、聚合氯化鋁、氯化鈣中的一種或含兩種以上的組合。

所述步驟5中，所述沉淀物（G)脫水是用無(wú)水乙醇實(shí)施脫水。

所述步驟1中，所述粗品肝素鈉溶解是：用NaCL溶液將粗品肝素鈉原料溶解，粗品肝素鈉溶液質(zhì)量濃度為8%-16%。

所述步驟1中，在粗品肝素鈉溶液中加入肝素酶解酶的質(zhì)量百分比是粗品肝素鈉溶液質(zhì)量的0. 1-0.3%。

所述步驟4中，沉淀物（C)的水溶液的質(zhì)量百分比濃度是8 % -20 % ;在沉淀物（C) 的水溶液中加入的氯化鋰的質(zhì)量百分比是沉淀物（C)水溶液質(zhì)量的I. 5% -8. 5% ;所用樹(shù)脂為離子型交換樹(shù)脂。

所述粗品肝素鈉是市售商品原料,效價(jià)為65-105IU/mg不等。

本發(fā)明，以粗品肝素鈉為原料，原料來(lái)源廣泛，成本較低。此外，本發(fā)明，硬件設(shè)施投入小，環(huán)境溫度要求不高，可實(shí)現(xiàn)工藝全程的常溫條件下操作（除局部需要短時(shí)間加熱的環(huán)節(jié)外），樹(shù)脂法動(dòng)態(tài)離子交換過(guò)程溫和，不會(huì)有活性損失，回收率達(dá)到95%以上，產(chǎn)品效價(jià)達(dá)到160IU/mg以上。

具體實(shí)施方式

步驟1:用1% -3%的NaCL溶液將粗品肝素鈉原料（市售商品原料，效價(jià) 65-105IU/mg不等）攪拌溶解，粗品肝素鈉濃度為8%-16% (質(zhì)量百分比濃度），用5M的 NaOH溶液調(diào)PH至7. 5-9. 0，升溫至50-55°C，按粗品肝素鈉溶液質(zhì)量的0. 1-0. 3%加入肝素酶解胰蛋白酶，保溫4-5小時(shí)，用5M的NaOH溶液調(diào)PH值至9. 0-11，升溫至85°C?90°C，冷卻到常溫，過(guò)濾去除沉淀物，濾液用0. 8-1. 5倍體積95%的乙醇沉淀4小時(shí)以上，收集沉淀物A ;

步驟2 :將沉淀物A用純水?dāng)嚢枞芙猓芙鉂舛葹?0% -20% (質(zhì)量百分比)，用 5M的NaOH溶液調(diào)PH至8. 5-11，按沉淀物A水溶液質(zhì)量的0. 1% -5%加入蛋白質(zhì)絮凝沉淀劑氯化鈣，攪拌1-2小時(shí)，靜置1小時(shí)以上，過(guò)濾去除沉淀，收集濾液，用5M的NaOH(或碳酸鈉）溶液調(diào)PH值至11-13，攪拌均勻，靜置30分鐘以上，過(guò)濾去除沉淀，收集濾液，用6M的 HCL溶液調(diào)PH值至中性，用0. 8-1. 5倍體積的95%乙醇沉淀4小時(shí)以上，收集沉淀物B ；

步驟3 :將沉淀物B用純水溶解，溶解濃度為15% -30% (質(zhì)量百分比濃度)，按沉淀物B水溶液質(zhì)量的1%?4%加入純度為30%的過(guò)氧化氫（可以分次加入），氧化24-48 小時(shí)，用5M的NaOH溶液調(diào)整PH至10. 5-11. 5，過(guò)濾去除沉淀物，收集濾液，用6M的HCL溶液調(diào)PH值至6. 5-7. 5，用0. 8-1. 5倍體積的95%乙醇沉淀4小時(shí)以上，收集沉淀物C ；

步驟4 :將所得沉淀物C用純水溶解，溶解度為8% -20% (質(zhì)量百分比濃度)，再按沉淀物C溶液質(zhì)量的1. 5% -8. 5%加入氯化鋰，攪拌溶解，通過(guò)已再生轉(zhuǎn)型好的離子型樹(shù)脂柱進(jìn)行離子交換，交換流速10BV/h以下，收集過(guò)柱流出液，并用1-2倍量的純水通柱，合并流出液，得肝素鋰鹽溶液；

步驟5 :將所得肝素鋰鹽溶液，過(guò)濾，用0. 8-3倍體積的95%乙醇沉淀4小時(shí)以上， 收集沉淀物，用無(wú)水乙醇脫水兩次，然后真空干燥，粉碎，得肝素鋰精品。