人臍帶血來源內(nèi)皮祖細胞
基本信息
產(chǎn)品名稱 ：人臍帶血來源內(nèi)皮祖細胞
產(chǎn)品品牌 ：紀(jì)寧生物
組織來源 ：臍帶血
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
人臍帶血來源內(nèi)皮祖細胞分離自臍帶血。臍帶血是胎兒娩出、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液。近十幾年的研究發(fā)現(xiàn)，臍帶血中含有可以重建造血和免疫系統(tǒng)的造血干細胞，可用于造血干細胞移植。因此，臍帶血已成為造血干細胞的重要來源。臍帶血中含有大量的干細胞，干細胞是生命的種子，它會分化成機體的各種細胞，結(jié)出各種不同的果實——血液細胞、神經(jīng)細胞、骨骼細胞等。
干細胞是具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體。這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數(shù)量，又可進一步分化為各種組織細胞，從而在組織修復(fù)等方面發(fā)揮積極作用。內(nèi)皮祖細胞是血管內(nèi)皮細胞的前體細胞，亦稱為成血管細胞(A ngioblast) ，是一群具有游走特性，能進一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細胞，缺乏成熟內(nèi)皮細胞的特征性表型，不能形成管腔樣結(jié)構(gòu)，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù)。
研究顯示，內(nèi)皮祖細胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路，E PC s生物學(xué)特性和治療作用的研究成為這一領(lǐng)域新的熱點。
方法簡介
紀(jì)寧生物實驗室分離的人臍帶血來源內(nèi)皮祖細胞采用密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
紀(jì)寧生物實驗室分離的人臍帶血來源內(nèi)皮祖細胞經(jīng)C D 34免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml) ，明膠(0. 1%)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 ：可傳1-2代。不建議多次傳代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
人臍帶血來源內(nèi)皮祖細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用紀(jì)寧生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
人臍帶血來源內(nèi)皮祖細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈內(nèi)皮細胞樣，在紀(jì)寧生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細胞可傳1-2代。不建議多次傳代。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1) 收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用吸管吸取PBS，吹洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液。經(jīng)1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細胞沉淀①。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，收集細胞懸液至離心管中。經(jīng)1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細胞沉淀②。
4) 吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基，重懸細胞沉淀①、細胞沉淀②,把①、②混勻。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，按實驗需求接種于實驗器皿內(nèi)，然后補充適量新鮮的
完全培養(yǎng)基，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6)待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，用于實驗?？梢悦?-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
3.細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
人臍帶血來源內(nèi)皮祖細胞
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和紀(jì)寧生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
