英文名稱 ：CoenzymeⅡ NADP(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)
產(chǎn)品包裝 ：盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ：50T/24S
儲(chǔ)存條件 ：-20℃
檢測(cè)方法 ：可見分光光度法
有 效 期 ：6個(gè)月
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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試劑酸性提取液
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液體15 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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堿性提取液
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液體15 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體30 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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粉劑×1 支
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-20℃保存
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試劑三
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液體12mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑四 A
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粉劑×1 支
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-20℃保存
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試劑四 B
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液體 10mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑五
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液體 70 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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NADP標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1 支
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-20℃保存
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NADPH標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1 支
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-20℃保存
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產(chǎn)品說明：
輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NADP+和NADPH含量測(cè)定可以計(jì)算 NADP(NADPH + NADP+)含量和NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。 NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和 NADPH。NADPH通過PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍(lán)(MTT)還原為甲瓚，570nm下檢測(cè)吸光值，從而測(cè)定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原 NADP+為NADPH，從而檢測(cè)NADP+含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋，研缽/勻漿器、超聲破碎儀，可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
注意事項(xiàng)：
1 、如果一次性測(cè)定樣本數(shù)較多，可將試劑一、二、三按比例配成混合液。
2 、反應(yīng)過程中注意避光。
3 、由于每一個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管，本試劑盒50管可以測(cè)定24個(gè)NADP+或 NADPH。
4 、如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。同步修改計(jì)算公式。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1. NADP+的測(cè)定：稱取0.1g冬青葉片，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.052-0.036=0.016，標(biāo)準(zhǔn)曲線y1=0.333x-0.0063,根據(jù)標(biāo)曲得出 x1=0.067，NADP+含量得：
NADP+ (nmol/g質(zhì)量)= x1÷W=0.67 nmol/g質(zhì)量。
NADPH 的測(cè)定：稱取 0.1g冬青葉片，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.153-0.096=0.057，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y2=0.0914x-0.0065,根據(jù)標(biāo)曲得出 x2=0.695 ，NADPH 含量得：NADPH (nmol/g質(zhì)量) = x2÷W=6.947 nmol/g 質(zhì)量。
2.NADP+的測(cè)定：稱取0.1g小鼠肝臟，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.042-0.028=0.014，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y1=0.333x-0.0063,根據(jù)標(biāo)曲得出x1=0.061 ，NADP+含量得：NADP+ (nmol/g質(zhì)量)= x1÷W=0.61nmol/g 質(zhì)量。
NADPH 的測(cè)定：稱取0.1g小鼠肝臟，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.19-0.063=0.127標(biāo)準(zhǔn)曲線 y2=0.0914x-0.0065,根據(jù)標(biāo)曲得出 x2=1.461，NADPH 含量得：NADPH (nmol/g 質(zhì)量) = x2÷W=14.61 nmol/g質(zhì)量。
3.NADP+的測(cè)定：取0.1mL牛血清，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.048-0.030=0.018，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y1=0.333x-0.0063,根據(jù)標(biāo)曲得出 x1=0.073，NADP+含量得： NADP+ (nmol/mL)= 11×x1=0.803 nmol/mL。
NADPH 的測(cè)定：取0.1mL牛血清，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-對(duì)照=0.056-0.032=0.024，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y2=0.0914x-0.0065,根據(jù)標(biāo)曲得出x2=0.334 ，NADPH含量得： NADPH (nmol/mL)= 11×x2=3.671nmol/mL。
