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上海紀(jì)寧生物與你分享小鼠ELISA試劑盒的使用技巧

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小鼠ELISA試劑盒
1 仔細(xì)閱讀說明書,熟悉整個流程,推薦畫出簡要步驟圖;提前準(zhǔn)備試劑。
2 樣本的準(zhǔn)備:盡量使用新鮮樣本,不使用有溶血,被細(xì)菌污染、標(biāo)本保存時間過長和標(biāo)本凝固不全的樣本。小鼠ELISA試劑盒檢測宜采集新鮮標(biāo)本,如不能立即測定,5天之內(nèi)應(yīng)4℃保存,對于1周后檢測的樣本應(yīng)低溫凍存;做好分裝,長時間凍存的樣本避免反復(fù)凍融。
3 不同批次的小鼠ELISA試劑盒不要混用,檢查各組分的有效期。
4 預(yù)包被的酶標(biāo)板條和各試劑組份需要室溫平衡30min以上,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需溫度,預(yù)防后續(xù)實驗中由于孵育溫度或是時間不夠充分,而將一些弱陽性樣本不能檢出。
5 待測樣本加樣:待檢樣本過多時,建議分批操作;需要稀釋的樣本提前做好稀釋,注意選對合適稀釋液;控制好加樣時間,避免加樣費時過長造成誤差;注意加樣角度,垂直加入孔底,不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
6 溫育和洗板:溫育時間和溫度一般根據(jù)試劑盒的說明書進(jìn)行選擇。溫育時可以采用水浴或者濕盒孵育,避免“邊緣效應(yīng)”。①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;②洗板機(jī)洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢。
7 顯色:一般是以雙組份(A:過氧化脲工作液,B液:TMB 工作液)為底物顯色液。反應(yīng)條件為37℃避光孵育15-30min。
8 讀數(shù)和數(shù)據(jù)分析:終止后讀取結(jié)果盡量在15min內(nèi)完成,讀取OD值時酶標(biāo)儀需先預(yù)熱15~30 min再進(jìn)行。數(shù)據(jù)分析一般用四參數(shù)和直線擬合法,選擇哪種擬合方式,可以依據(jù)標(biāo)曲的相關(guān)系數(shù)(R2)來確定,R2一般大于0.95可用。大于0.99是最佳。
ELISA試劑盒是一個很好的科研工具只要選對了、用對了實驗就會事半功倍。以上是上海紀(jì)寧生物分享的如何使用小鼠ELISA試劑盒技巧希望對您有所幫助。

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